TET家族的5mC羥化酶包括TET1、TET2和TET3。這些TET蛋白可能通過(guò)結(jié)合到富含CpG的區(qū)域來(lái)防止不必要的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性，并通過(guò)羥化酶活性將5mC轉(zhuǎn)化為5hmC，進(jìn)而轉(zhuǎn)化為5-羧基胞嘧啶（5-caC），從而促進(jìn)DNA去甲基化。研究表明，基因組5hmC水平與TET羥化酶活性相關(guān)。此外，TET1在胚胎干細(xì)胞中通過(guò)結(jié)合不同靶基因顯示出轉(zhuǎn)錄激活和抑制的雙重功能。TET1也是急性髓性白血病中MLL基因的融合伴侶，被認(rèn)為是一種癌蛋白。TET2在白血病中經(jīng)常發(fā)生突變，被認(rèn)為具有腫瘤抑制作用。TET3已被證明在哺乳動(dòng)物合子中的DNA甲基化重編程過(guò)程中發(fā)揮d特作用。因此，在癌癥診斷和開(kāi)發(fā)新的基于靶點(diǎn)的癌癥治療中，激活腫瘤抑制因子TET酶如TET2或抑制癌蛋白TET酶如TET1將是重要的。然而，目前檢測(cè)使用核提取物和純化酶的TET羥化酶活性/抑制的方法很少。為了解決這個(gè)問(wèn)題，EpigenTek開(kāi)發(fā)并提供了Epigenase™ 5mC羥化酶TET活性/抑制檢測(cè)試劑盒（比色法）。

5mC-羥化酶TET活性/抑制分析試劑盒用途：

適用于使用核提取物或從包括哺乳動(dòng)物、植物、真菌和細(xì)菌等多種物種中純化的TET同種型（TET 1-3）來(lái)測(cè)量總5mC羥化酶TET酶的活性/抑制。這些樣本可以是培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮和冷凍組織等多種形式，但不限于此。

艾美捷-5mC-羥化酶TET活性/抑制分析試劑盒（#P-3086）組分：

5mC-羥化酶TET活性/抑制分析試劑盒具有以下優(yōu)點(diǎn)和特性：

比色法檢測(cè)，步驟簡(jiǎn)單易跟，方便快速。整個(gè)程序可在5小時(shí)內(nèi)完成。

直接測(cè)量TET羥化酶活性，通過(guò)直接檢測(cè)TET轉(zhuǎn)化的羥甲基化產(chǎn)物。

創(chuàng)新的試劑盒組合使背景信號(hào)極低，使檢測(cè)簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、可靠和一致。

可以使用細(xì)胞/組織提取物和純化的TET蛋白，這允許檢測(cè)體內(nèi)外TET羥化酶抑制劑的抑制效果。

新穎的檢測(cè)原理實(shí)現(xiàn)了高靈敏度。可以檢測(cè)低至20納克的純化TET1羥化酶的活性。

包含羥甲基化標(biāo)準(zhǔn)品，可以量化TET羥化酶的特異性活性。

條形微孔板格式使檢測(cè)靈活：手動(dòng)或高通量分析（96個(gè)檢測(cè)）。

原理與操作流程：

在這個(gè)檢測(cè)中，一個(gè)甲基化的底物被穩(wěn)定地包被在微孔板孔中。活性的TET酶與底物結(jié)合，將甲基化底物轉(zhuǎn)化為羥甲基化產(chǎn)物。這些由TET轉(zhuǎn)化的羥甲基化產(chǎn)物可以被特定的抗體識(shí)別。羥甲基化產(chǎn)物的比率或數(shù)量，與酶活性成正比，可以通過(guò)在450納米波長(zhǎng)的微孔板分光光度計(jì)上讀取吸光度來(lái)進(jìn)行比色測(cè)量。TET酶的活性反過(guò)來(lái)與所測(cè)量的光密度強(qiáng)度成正比。

5mC-羥化酶TET活性/抑制分析試劑盒運(yùn)輸與儲(chǔ)存：

試劑盒分三部分運(yùn)輸：第一部分在常溫下運(yùn)輸，第二和第三部分則在4°C的冰凍冰袋中運(yùn)輸。收到后請(qǐng)按以下方法儲(chǔ)存：(1) 將TS、HC5、HC7、HC8、輔因子1、輔因子2和輔因子3存放在-20°C的避光環(huán)境中；(2) 將WB、HC6、DS和8孔檢測(cè)條存放在4°C的避光環(huán)境中；(3) 將其余組分（TAB、BS和SS）存放在常溫的避光環(huán)境中。

注意：使用前檢查WB 10X洗滌緩沖液是否含有鹽類(lèi)沉淀物。如果有，將其在室溫或37°C下加熱并搖動(dòng)緩沖液，直到鹽類(lèi)重新溶解。

如果儲(chǔ)存得當(dāng)，試劑盒的所有組分從發(fā)貨日期起穩(wěn)定有效期為6個(gè)月。

相關(guān)產(chǎn)品：

核提取物制備：

OP-0002-1 EpiQuik™ 核提取物提取試劑盒

DNA 羥甲基化：

P-1036 MethylFlash™ 羥甲基化DNA定量試劑盒（比色法）

P-1037 MethylFlash™ 羥甲基化DNA定量試劑盒（熒光法）

P-1038 EpiQuik™ 羥甲基化DNA免疫沉淀（hMeDIP）試劑盒

P-3087 Epigenase™ 5mC-羥化酶TET活性/抑制試劑盒（熒光法）