一、實驗介紹
Cell Counting Kit-8(簡稱CCK-8)試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為:該試劑中含有WST-8【化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物(Formazan dye)。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。
二、實驗目的
1.藥物(也包括其他處理方式如放射線照射)對體外培養的細胞毒性的測定;
2.細胞增殖及細胞活性測定。
三、實驗步驟
四、送樣運輸要求:
1 凍存細胞
凍存管寄送前,使用封口膜把凍存管口封嚴密,凍存管單獨用自封袋存放。干冰運輸。運輸時間在2天以內干冰用量在10kg,在2-4天,干冰用量在20kg。
2 活細胞
使用T25瓶,瓶蓋無孔。
生長狀態良好的細胞,細胞密度在30%-40%為宜,寄送前,移去瓶內舊培養基,添加新培養基至瓶頸部,保留微量空氣,擰緊瓶蓋,并用封口膜密封,瓶身用75%表面消毒,把瓶用無菌袋或自封袋包裝,然后放置在適當的盒內,盒周圍用棉花等做防震防壓處理。當溫度低于10度是要加保溫措施,如暖寶寶等。
細胞培養條件備注完整,如培養基,培養溫度,FBS用量等。
備注:運送時間原則在4天以內,如細胞生長速度快,則加入的培養基血清可以減半,細胞密度在20%-30%。
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