如何用酶標儀檢測食品及飼料中的三聚氰胺

——酶聯免疫吸附定量測定法

適用：

利用酶聯免疫吸附測定法用于食品及飼料中三聚氰胺的定量測定。

檢測原理：

酶聯免疫吸附測定法定量測定三聚氰胺殘留。利用萃取液通過均質及振蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺進行免疫測定。先將三聚氰胺酶標記物，樣品萃取物及標準加入到已經包被有三聚氰胺抗體的微孔中開始反應。在30分鐘的孵育過程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標記物競爭結合微孔中的三聚氰胺抗體，孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒有結合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標記物。再用去離子水清洗結束后，每孔中加入清澈的底物溶液，結合的酶標記物將無色的底物轉化為藍色的物質。孵育30分鐘后停止此反應，根據各孔顏色深淺進行數據讀取。依據標準的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值。

設備及材料：

1、具有450nm的酶標分析儀

2、8頭或12頭洗板機（選配）

3、三聚氰胺檢測試劑盒

4、可吸取50ul的移液器及吸頭及.吸水紙

5、蒸餾水或去離子水

5、 20mM PBS： 0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸餾水定容至1000ml. 

6、清洗液：0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸餾水定容至1000ml.+0.5ml 土溫20

樣品飼料前處理：（稀釋倍數：20）

1、稱1g飼料樣品，加入4ml甲醇；

2、震蕩1min，加入0.1g氯化鈉；

3、4000轉離心5min；

4、取上清液0.2ml加入到0.8ml 20mMPBS中，混勻。

5、取150ul測定。

檢測：

1、先將三聚氰胺酶標記物50ul，樣品150ul及標準150ul加入到已經包被有三聚氰胺抗體的微孔中開始反應。

2、在30分鐘的孵育過程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標記物競爭結合微孔中的三聚氰胺抗體；

3、孵育30分鐘后用清洗液洗掉小孔中所有沒有結合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標記物。清洗四次后，放在桌上用吸水紙吸掉微孔板里多余的水份；

4、清洗結束后，每孔中加入100ul清澈的底物溶液，結合的酶標記物將無色的底物轉化為藍色的物質。

5、孵育30分鐘后加入100ul 停止液STOP停止此反應，根據各孔顏色深淺進行數據讀取。依據標準的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值

結果分析：

1、半定量的結果是由樣品的吸光率與標準的吸光率的簡單對比而來判定：樣品的顏色比標準的顏色淺，則三聚氰胺的濃度比標準樣的濃度高，樣品的顏色比標準的顏色深則三聚氰胺的濃度比標準樣的濃度低。

2、定量分析需要繪制以標準樣的吸光率為X軸,以標準樣的濃度的半對數為Y軸的曲線圖。依據標準樣。

吸光率的點畫成一直線,如此樣品的光吸收率可在線上找到,與此相對應的Y軸則為樣品的濃度,樣品光吸收率。

范圍應比標準樣的zui底范圍高,比zui高范圍低, 即可說明此樣品中三聚氰胺的含量大于500ppb或小于20ppb。

特點：

本產品為酶聯免疫吸附測定法（ELISA）法，靈敏度高、檢測成本低，可適用于生產及檢驗單位大批量快速篩查。