Endo F Multi-kit 推薦用于去除那些由于糖鏈在蛋白質三維結構中的位置,在非變性條件下抵抗PNGase F裂解的天然蛋白質的糖基。這些酶對蛋白質構象的敏感性較低。
每種酶具有不同的N-連接糖鏈特異性:
內切糖苷酶F1(Endoglycosidase F1)裂解高甘露糖和某些雜合型N-連接糖鏈。
內切糖苷酶F2(Endoglycosidase F2)釋放雙天線和高甘露糖糖鏈(速率降低40倍)。
內切糖苷酶F3(Endoglycosidase F3)將釋放三天線和巖藻糖基化的雙天線N-連接糖鏈。
艾美捷QA-Bio-Endo F多功能試劑盒(KE-EFX3)應用范圍:
去除天然蛋白質中抵抗PNGase F裂解的糖基。
確定糖鏈類型(高甘露糖、雙天線、三/四天線)。
去除在去糖基化時通常沉淀的蛋白質中的糖基。
X射線晶體學。
QA-Bio-Endo F多功能試劑盒使用說明:
向Eppendorf管中添加多達200微克的糖蛋白。用去離子水調整至最終體積34微升。
添加10微升Endo F2/F3 5倍反應緩沖液,250 mM 醋酸鈉 pH 4.5。如果單獨使用Endo F1酶,請使用Endo F1緩沖液,250 mM 磷酸鈉 pH 5.5。
向反應中添加每種酶2.0微升。在37°C下孵化3小時。 通過SDS-PAGE監測裂解情況。
QA-Bio-Endo F多功能試劑盒文獻參考:
Maley P., R. B. Trimble, A. L. Tarentino and T. H. Plummer Jr. Characterization of glycoproteins and their associated oligosaccharides through the use of endoglycosidases. Anal Biochem 180:195-204 (1989).
Plummer, T. H. Jr, A. W. Phelan and A. L. Tarentino. Porcine fibrinogen glycopeptides: substrates for detecting endo-N-acetylglucosaminidases F2 and F3. Anal Biochem 235:98-101 (1996).
Tarentino A. L., G. Quinones, L. M. Changchien, and T. H. Plummer Jr. Multiple endoglycosidaseF activities expressed by Flavobacterium meningosepticum endoglycosidases F2 and F3: Molecular cloning, primary sequence, and enzyme expression. J Biol Chem 268(13):9702-9708 (1993).
Tarentino A. L. and T. H. Plummer Jr. Substrate specificity of Flavobacterium meningosepticum: Endo F2 and endo F3: purity is the name of the game. Glycobiology 4:771-773 (1994).
艾美捷科技是QA-Bio的中國代理商,為科研工作者提供優質的產品與服務。
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