在雙抗體夾心ELISA測定中，樣品中存在的IgM與已吸附在聚苯乙烯微量滴定池表面的抗IgM抗體反應。在通過洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）綴合的抗IgM抗體。這些酶標記的抗體與先前結(jié)合的IgM形成復合物。在另一個洗滌步驟之后，通過添加無色底物3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來測定與免疫吸附結(jié)合的酶。結(jié)合酶的數(shù)量與所測試樣品中IgM的濃度直接相關(guān)；因此，在450nm處的吸光度是測試樣品中IgM濃度的測量值。試驗樣品中IgM的量可以根據(jù)標準曲線進行插值，并根據(jù)樣品稀釋度進行校正。

艾美捷BGT-IgM (雞) ELISA Kit：

貨號：BGT-KET-131

抗體類型：酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）

宿主：山羊

特異性/靶標：免疫球蛋白M（IgM）

規(guī)格：1.0

檢測范圍：3.125 ng/ml - 200 ng/ml

靈敏度：0.979 ng/ml

測定時間：70 分鐘

樣本類型：血漿、血清

儲存條件：2-8°C

IgM檢測試劑盒是一種高靈敏度的雙位點酶聯(lián)免疫測定法（ELISA），用于測量雞生物樣品中的IgM。如果ELISA在預期用途之外使用，用戶可能需要優(yōu)化saiduse。

樣品收集和處理：

所有血液組分和生物材料應被視為潛在的危險物質(zhì)。在處理和處置時，應遵循通用預防措施。如果血樣出現(xiàn)凝血、嚴重溶血、脂血，或者樣本的完整性受到質(zhì)疑，請做好記錄并謹慎解釋結(jié)果。下面列出的樣品收集和儲存條件是一般性指導。尚未評估樣本的穩(wěn)定性。

血清樣本 - 應通過靜脈穿刺采集血液。血液凝固后，應通過離心分離血清。取出血清并立即檢測，或分裝樣本并儲存在-80°C或-20°C。避免反復凍融。

血漿樣本 - 應將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進行離心。立即檢測或分裝樣本并儲存在-80°C或-20°C。避免反復凍融。

尿液樣本 - 使用無菌或干凈的尿液收集器收集中段尿。離心以去除細胞碎片。立即檢測或分裝樣本并儲存在-80°C或-20°C。避免反復凍融。

已知干擾物質(zhì) - 濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會抑制酶反應。

樣品稀釋：

在使用前，該檢測要求每個待測樣本都要進行稀釋。每次進行檢測時，所有樣本都應以雙份進行檢測。推薦的稀釋度僅供參考。稀釋度應基于未知樣本的預期濃度，以便稀釋后的樣本落在標準曲線的動態(tài)范圍內(nèi)。如果不確定樣本水平，在運行整個板之前，強烈建議對一個或兩個代表性樣本進行系列稀釋。

血清樣本 - 推薦的起始稀釋度為1/2,000。要準備1/2,000的樣本稀釋液，將5微升的樣本轉(zhuǎn)移到495微升的1X稀釋液中。這將得到1/100的稀釋度。接下來，通過將20微升的1/100稀釋液轉(zhuǎn)移到380微升的1X稀釋液中來稀釋1/100，這將得到1/2,000的稀釋度。每個階段都要C底混合。

血漿樣本 - 推薦的起始稀釋度為1/2,000。要準備1/2,000的樣本稀釋液，將5微升的樣本轉(zhuǎn)移到495微升的1X稀釋液中。這將得到1/100的稀釋度。接下來，通過將20微升的1/100稀釋液轉(zhuǎn)移到380微升的1X稀釋液中來稀釋1/100，這將得到1/2,000的稀釋度。每個階段都要C底混合。

試劑準備：

使用前將所有試劑預熱至室溫（16°C至25°C）。

稀釋液濃縮液 提供的稀釋液溶液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，4份dH2O）稀釋1/5。

洗滌液濃縮液 提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，19份dH2O）稀釋1/20。如果儲存溫度較低，濃縮液中可能會形成晶體。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體。

酶-抗體結(jié)合物 通過向990微升1X稀釋液中添加10微升酶-抗體結(jié)合物來計算每個微孔板測試條所需的工作結(jié)合物溶液量。使用前立即稀釋，并避光保存。均勻混合，但要輕柔。避免產(chǎn)生泡沫。

預包被的ELISA微孔板 按提供的狀態(tài)使用即可。打開鋁箔袋，從袋中取出板。取出在檢測中不會使用的條和孔，放回袋中并重新密封，同時放回干燥劑。

雞IgM校準物 根據(jù)批次特定的分析證書進行準備。