RPPA靶向蛋白組學(xué)分析

靶向蛋白質(zhì)組學(xué)-反相蛋白微陣列(Reverse Phase Protein Array, RPPA)技術(shù)是一種結(jié)合平面高精度大規(guī)模樣品蛋白抗原微陣列打印和抗體檢測(cè)的高通量蛋白組學(xué)技術(shù)，該平臺(tái)引進(jìn)自MD安德森個(gè)體化治療中心，具有高通量和高內(nèi)涵雙重優(yōu)勢(shì)，可平行分析上千個(gè)樣本中幾百種關(guān)鍵癌癥蛋白的表達(dá)水平及翻譯后修飾。

并作為T(mén)he Cancer Genome Atlas (TCGA)的核心蛋白組學(xué)技術(shù)平臺(tái)，承擔(dān)了33種癌種、超過(guò)10000例臨床樣本的數(shù)據(jù)采集與分析工作，其相關(guān)研究成果發(fā)表在Nature、Cell、Cancer Cell、New England Journal of Medicine、Nature Biotechnology等學(xué)術(shù)雜志的高水平論文多達(dá)500篇以上。

RPPA技術(shù)平臺(tái)設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)精密，流程高度自動(dòng)化，質(zhì)量控制極其嚴(yán)格，每次進(jìn)行樣品蛋白抗原微陣列打印，都會(huì)將多種陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系樣品與待分析樣品一起進(jìn)行點(diǎn)陣，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的高度可追溯、高度可信度與可重復(fù)性。RPPA可在15毫克組織中（米粒大小）一次性分析多達(dá)500種以上不同豐度蛋白，且抗體反應(yīng)過(guò)程及靶點(diǎn)信號(hào)采集彼此獨(dú)立，避免了不同靶標(biāo)抗體反應(yīng)之間的串?dāng)_及不同靶標(biāo)豐度差異較大帶來(lái)的信號(hào)采集無(wú)法兼容的問(wèn)題，具有其它高通量蛋白組學(xué)所五可比擬的超高特異性和靈敏度，可以對(duì)大量細(xì)胞表面受體蛋白、細(xì)胞信號(hào)關(guān)鍵蛋白及蛋白修飾（磷酸化、乙酰化、甲基化等）、蛋白酶類(lèi)、轉(zhuǎn)錄因子等各類(lèi)代表性靶標(biāo)進(jìn)行分門(mén)別類(lèi)的系統(tǒng)深度檢測(cè)，也可根據(jù)需求定制所需研究的靶點(diǎn)蛋白進(jìn)行分析，包括直接和間接的上下游蛋白網(wǎng)絡(luò)分析。RPPA可應(yīng)用于蛋白功能與調(diào)控機(jī)理分析、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)全景掃描、腫瘤標(biāo)志物及蛋白分子分型、藥物靶標(biāo)發(fā)現(xiàn)與藥物機(jī)理分析等不同領(lǐng)域。  

一、RPPA——源自MD安德森，TCGA的蛋白組學(xué)分析策略

二、RPPA技術(shù)服務(wù)Panel設(shè)置

三、RPPA技術(shù)服務(wù)流程

四、RPPA技術(shù)服務(wù)特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)

1、樣本需求量少

20-40微克蛋白即可實(shí)現(xiàn)380靶點(diǎn)檢測(cè)，能夠滿(mǎn)足RPPA分析的樣品范圍廣，包括臨床實(shí)體瘤手術(shù)樣品、穿刺活檢標(biāo)本、PDX模型樣品、體外培養(yǎng)細(xì)胞、3D培養(yǎng)物等都廣泛適用。

2、標(biāo)準(zhǔn)化的樣品處理和分析

蛋白及蛋白修飾位點(diǎn)在蛋白變性后的線性狀態(tài)下檢測(cè)，樣本穩(wěn)定性高，消除表位識(shí)別中潛在的問(wèn)題。基于ISO15189質(zhì)量管理體系的標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)流程，質(zhì)控嚴(yán)格，能夠高效對(duì)大樣本平行進(jìn)行檢測(cè)、數(shù)據(jù)分析與評(píng)估。

3、靶點(diǎn)獨(dú)立檢測(cè)，樣本通量高

針對(duì)一個(gè)檢測(cè)靶標(biāo)，在同一反應(yīng)微環(huán)境下平行分析100-1000個(gè)樣本，樣本通量明顯高于其他蛋白組學(xué)技術(shù)平臺(tái)，而且獨(dú)立進(jìn)行各靶點(diǎn)檢測(cè)反應(yīng)，萬(wàn)全排除不同靶點(diǎn)間信號(hào)串?dāng)_問(wèn)題。

4、不同豐度靶點(diǎn)信號(hào)兼容性高

樣品微陣列經(jīng)過(guò)精心設(shè)計(jì)，設(shè)立嚴(yán)格和全面的多種細(xì)胞系樣品對(duì)照，每一個(gè)樣品(包括待測(cè)樣品與對(duì)照樣品)都進(jìn)行系列梯度稀釋?zhuān)悬c(diǎn)信號(hào)進(jìn)行相對(duì)定量，能夠兼顧不同豐度靶點(diǎn)信號(hào)，且能夠檢出微小信號(hào)差別及低豐度信號(hào)，靈敏度高。

5、兼具系統(tǒng)性與靈活性

既能對(duì)前期積累的關(guān)鍵信號(hào)通路與代表性靶標(biāo)(380種)進(jìn)行分門(mén)別類(lèi)的系統(tǒng)深度檢測(cè)，也可根據(jù)需求定制所需研究的靶點(diǎn)蛋白進(jìn)行個(gè)性化分析，兼具系統(tǒng)性與靈活性。

6、專(zhuān)業(yè)和豐富的RPPA技術(shù)服務(wù)經(jīng)驗(yàn)

專(zhuān)業(yè)的技術(shù)服務(wù)團(tuán)隊(duì)，10年以上RPPA反相蛋白微陣列技術(shù)服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，國(guó)際儀流的實(shí)驗(yàn)室條件和自動(dòng)化水平，確保可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。可實(shí)現(xiàn)一對(duì)一的項(xiàng)目方案設(shè)計(jì)，靈活性強(qiáng)，充分理解實(shí)驗(yàn)需求，從樣本準(zhǔn)備開(kāi)始直到數(shù)據(jù)分析挖掘都由專(zhuān)項(xiàng)人員負(fù)責(zé)，充分將臨床樣本中能獲得的數(shù)據(jù)信息和臨床病人資料進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。

五、RPPA技術(shù)服務(wù)應(yīng)用場(chǎng)景

目前，根據(jù)不同分析需求，RPPA技術(shù)服務(wù)可以支持以下兩大模式的應(yīng)用場(chǎng)景。

五、RPPA技術(shù)服務(wù)應(yīng)用場(chǎng)景

目前，根據(jù)不同分析需求，RPPA技術(shù)服務(wù)可以支持以下兩大模式的應(yīng)用場(chǎng)景。

萬(wàn)全