經常吃的銀耳木耳就有！測測其中的糖含量

關鍵詞：離子色譜；食用菌；巖藻糖；阿糖醇；海藻糖；甘露糖；甘露醇；葡萄糖；半乳糖；核糖；方法學。

前言

食用菌屬于真菌類生物,并含有生物活性物質,可以在一定程度上提高人體的免疫力,食用菌也有抗癌的作用,其中所含的多糖體可以刺激抗體的形成,從而增強內部防御能力,并降低某些物質誘發腫瘤的幾率。

目前市面上出現的食用菌保健品，無法確定其提取液是食用菌提取出來的，還是由其他添加劑中提取出來的。所以將樣品中單糖提取出來并水解，根據糖的分布不同以此來鑒定不同食用菌。

皖儀開發了一種離子色譜測試方法檢測食用菌中的八種糖含量，樣品前處理操作簡單，測試準確性高，重現性好，不同組分間分離度良好，可以滿足客戶大規模測試的要求，并且提高時效性，測試結果一致性，減少人為及系統誤差。

1.  實驗方法

1.1  測試條件

離子色譜儀IC6300系列

儀器：IC6300系列離子色譜儀配置安培檢測器；

色譜柱：糖類專用色譜柱（4.0mm×250mm）；

保護柱：糖類專用保護柱（30 mm×4 mm）；

柱溫：45℃；

流速：0.4ml/min；

進樣量：25μL；

檢測器：安培檢測器。

1.2 使用試劑

淋洗液：A：超純水   B：600mM NaOH 

標樣：

巖藻糖：純度≥99％或經國家認證授予標準物質證書的標準物質；

阿糖醇：純度≥99％或經國家認證授予標準物質證書的標準物質；

海藻糖：純度≥99％或經國家認證授予標準物質證書的標準物質；

甘露糖：純度≥99％或經國家認證授予標準物質證書的標準物質；

葡萄糖：純度≥99％或經國家認證授予標準物質證書的標準物質

半乳糖：純度≥99％或經國家認證授予標準物質證書的標準物質

核糖：純度≥99％或經國家認證授予標準物質證書的標準物質

甘露醇：純度≥99％或經國家認證授予標準物質證書的標準物質

樣品：食用菌

1.3 標準溶液制備

單一標準儲備液：分別稱取0.1g（精確至0.1mg）巖藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖標準品，用0.1％苯甲酸溶液溶解，轉移至100mL容量瓶定容至刻度，配置成濃度為1000mg/L的單一標準儲備液，貯存在4℃條件下，有效期一個月。

混合標準中間液(100mg/L):分別移取20.00mL巖藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖單一標準儲備液于200mL容量瓶中,用0.1％苯甲酸溶液定容至刻度。置于0℃~4℃密封，保存期1個月。

混合標準工作液:分別吸取0.250mL、0.500mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL、20.00mL和50.00mL混合標準中間液(100mg/L)于100mL容量瓶中,用0.1％苯甲酸溶液定容至刻度,配得巖藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖質量濃度為0.25mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、5.00mL、10.00mL、20.00mg/L和50.00mg/L的混合標準工作液。臨用現配。

1.3 標準曲線的制備

混合標準工作液：分別吸取0.250mL、0.500mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL、20.00mL和50.00mL混合標準中間液(100mg/L)于100mL容量瓶中,用水定容至刻度,配得巖藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖的質量濃度為0.25mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、5.00mL、10.00mL、20.00mg/L和50.00mg/L的混合標準工作液。臨用現配。

表1 標準系列曲線濃度梯度表

2．測試結果

2.1 巖藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖線性測試結果

依次移取0.25mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、5.00mL、10.00mL、20.00mg/L和50.00mg/L的系列標準工作曲線，按照1.1工作測試條件得到標準曲線線譜圖多點重疊圖如圖1，果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖在該色譜條件下線性相關系數R=0.999以上，線性良好。

圖1 食用菌中八種糖標準曲線重疊色譜圖

表2線性方程

2.2 巖藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖標準品譜圖

在1.1的工作測試條件下條件下，標準品進行檢測。樣品圖譜如圖2，所示樣品圖譜中的目標離子巖藻糖、阿糖醇、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖峰形對稱，分離度良好，最終得到樣品中巖藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖的含量。繡球菌中阿糖醇含量為0.48mg/g，甘露醇含量為3.525mg/g，巖藻糖含量為13.125mg/g，甘露糖含量為33.015mg/g，葡萄糖含量為273.75mg/g，半乳糖含量為29.415mg/g。

圖2 樣品測試譜圖

2.3 樣品加標回收重復性測試結果

分別向樣品加5mg/L、10mg/L、25mg/L的標準品，每個濃度3個平行樣品進行測定，其測定譜圖分別如圖3-5所示，其回收率在95.25％~105.94％。

圖三 樣品中加標5mg/L測試譜圖

圖四 樣品加標10mg/L測試重疊圖譜

圖五 樣品加標25mg/L測試重疊圖譜

2.4 檢出限測試

對0.25mg/L糖類標準品進行檢出限測定，其信噪比在95~505之間，大于3,圖六為樣品進一步稀釋后加標測試圖譜。

圖六 0.25mg/L標準品測試圖譜

表三 檢出限與定量限測定表

3. 結論

本次采用皖儀科技離子色譜儀IC6300系列對食用菌中的八種糖進行測試，包含系統適用性、標準曲線驗證、重復性驗證、加標回收率。測試結果峰形較好，線性良好，重復性滿足要求，靈敏度高完全滿足測試要求。