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離子色譜法檢測食用菌中的八種糖含量

來源:安徽皖儀科技股份有限公司   2024年05月31日 15:34  


經常吃的銀耳木耳就有!測測其中的糖含量



關鍵詞:離子色譜;食用菌;巖藻糖;阿糖醇;海藻糖;甘露糖;甘露醇;葡萄糖;半乳糖;核糖;方法學。

 

前言

 

食用菌屬于真菌類生物,并含有生物活性物質,可以在一定程度上提高人體的免疫力,食用菌也有抗癌的作用,其中所含的多糖體可以刺激抗體的形成,從而增強內部防御能力,并降低某些物質誘發腫瘤的幾率。

目前市面上出現的食用菌保健品,無法確定其提取液是食用菌提取出來的,還是由其他添加劑中提取出來的。所以將樣品中單糖提取出來并水解,根據糖的分布不同以此來鑒定不同食用菌。


皖儀開發了一種離子色譜測試方法檢測食用菌中的八種糖含量,樣品前處理操作簡單,測試準確性高,重現性好,不同組分間分離度良好,可以滿足客戶大規模測試的要求,并且提高時效性,測試結果一致性,減少人為及系統誤差。

 

1.  實驗方法


1.1  測試條件

 

1.png

離子色譜儀IC6300系列

 

儀器:IC6300系列離子色譜儀配置安培檢測器;

色譜柱:糖類專用色譜柱(4.0mm×250mm);

保護柱:糖類專用保護柱(30 mm×4 mm);

柱溫:45℃;

流速:0.4ml/min

進樣量:25μL

檢測器:安培檢測器。

 

1.2 使用試劑

淋洗液:A:超純水   B600mM NaOH 

標樣:

巖藻糖:純度≥99%或經國家認證授予標準物質證書的標準物質;

阿糖醇:純度≥99%或經國家認證授予標準物質證書的標準物質;

海藻糖:純度≥99%或經國家認證授予標準物質證書的標準物質;

甘露糖:純度≥99%或經國家認證授予標準物質證書的標準物質;

葡萄糖:純度≥99%或經國家認證授予標準物質證書的標準物質

半乳糖:純度≥99%或經國家認證授予標準物質證書的標準物質

核糖:純度≥99%或經國家認證授予標準物質證書的標準物質

甘露醇:純度≥99%或經國家認證授予標準物質證書的標準物質

樣品:食用菌

 

1.3 標準溶液制備

單一標準儲備液:分別稱取0.1g(精確至0.1mg)巖藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖標準品,用0.1%苯甲酸溶液溶解,轉移至100mL容量瓶定容至刻度,配置成濃度為1000mg/L的單一標準儲備液,貯存在4℃條件下,有效期一個月。

 

混合標準中間液(100mg/L):分別移取20.00mL巖藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖單一標準儲備液于200mL容量瓶中,0.1%苯甲酸溶液定容至刻度。置于0~4℃密封,保存期1個月。

混合標準工作液:分別吸取0.250mL0.500mL1.00mL2.00mL5.00mL10.00mL20.00mL50.00mL混合標準中間液(100mg/L)100mL容量瓶中,0.1%苯甲酸溶液定容至刻度,配得巖藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖質量濃度為0.25mg/L0.50mg/L1.00mg/L2.00mg/L5.00mL10.00mL20.00mg/L50.00mg/L的混合標準工作液。臨用現配。

 

1.3 標準曲線的制備

混合標準工作液:分別吸取0.250mL0.500mL1.00mL2.00mL5.00mL10.00mL20.00mL50.00mL混合標準中間液(100mg/L)100mL容量瓶中,用水定容至刻度,配得巖藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖的質量濃度為0.25mg/L0.50mg/L1.00mg/L2.00mg/L5.00mL10.00mL20.00mg/L50.00mg/L的混合標準工作液。臨用現配。

 

1 標準系列曲線濃度梯度表

2.png

 

2.測試結果

 

2.1 巖藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖線性測試結果

 

依次移取0.25mg/L0.50mg/L1.00mg/L2.00mg/L5.00mL10.00mL20.00mg/L50.00mg/L的系列標準工作曲線,按照1.1工作測試條件得到標準曲線線譜圖多點重疊圖如圖1,果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖在該色譜條件下線性相關系數R=0.999以上,線性良好。

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1 食用菌中八種糖標準曲線重疊色譜圖

 

2線性方程

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2.2 巖藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖標準品譜圖

1.1的工作測試條件下條件下,標準品進行檢測。樣品圖譜如圖2,所示樣品圖譜中的目標離子巖藻糖、阿糖醇、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖峰形對稱,分離度良好,最終得到樣品中巖藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露糖、甘露醇、葡萄糖、半乳糖、核糖的含量。繡球菌中阿糖醇含量為0.48mg/g,甘露醇含量為3.525mg/g,巖藻糖含量為13.125mg/g,甘露糖含量為33.015mg/g,葡萄糖含量為273.75mg/g,半乳糖含量為29.415mg/g

 

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2 樣品測試譜圖

 

2.3 樣品加標回收重復性測試結果

分別向樣品加5mg/L10mg/L25mg/L的標準品,每個濃度3個平行樣品進行測定,其測定譜圖分別如圖3-5所示,其回收率在95.25~105.94%。

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圖三 樣品中加標5mg/L測試譜圖

 

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圖四 樣品加標10mg/L測試重疊圖譜

 

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圖五 樣品加標25mg/L測試重疊圖譜

 

2.4 檢出限測試

0.25mg/L糖類標準品進行檢出限測定,其信噪比在95~505之間,大于3,圖六為樣品進一步稀釋后加標測試圖譜。

 

9.png

圖六 0.25mg/L標準品測試圖譜

 

表三 檢出限與定量限測定表

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3. 結論

 

本次采用皖儀科技離子色譜儀IC6300系列對食用菌中的八種糖進行測試,包含系統適用性、標準曲線驗證、重復性驗證、加標回收率。測試結果峰形較好,線性良好,重復性滿足要求,靈敏度高完全滿足測試要求。




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