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細胞消化的關鍵點!

來源:上海瑋馳儀器有限公司   2024年05月13日 16:33  

一,細胞潤洗次數

絕大部分細胞用胰酶潤洗一次即可

胰酶是一種蛋白酶,酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈,通過在特定位置上降解蛋白,使細胞膜上與培養皿壁結合處蛋白降解,從而使兩者分離。這時,細胞由于自身內部細胞骨架的張力以及培養液表面張力可成為球形。

由于在細胞培養中,胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。胰酶作用時間過長、作用次數過多,都容易破壞細胞表面結構。

在吸去培養基后,用37℃預熱過的PBS潤洗細胞表面1-2次,隨后加入適量胰酶,以能夠平鋪在器皿底部一層,略蓋過細胞為原則。可放入37℃培養箱中孵育1-2分鐘。

二,何時終止消化

貼壁細胞層呈流沙狀可移動即可終止消化

有不少細胞培養人員,喜歡把全部細胞,消化成間隔分布很離散的單個圓形的細胞,但實際上,此時的細胞已經處于“消化過度”的狀態了。

因此,肉眼觀察下,50%左右細胞呈現流沙狀,或鏡下觀察細胞質回縮,細胞之間不再連接成片,即可加入胰酶2-3倍體積的含血清培養基,終止消化。

逐典TrypLUS消化液是一種胰蛋白酶類似物(Trypsin Like Enzyme),是一種通過生物工程制備的非動物源性重組蛋白酶,與胰蛋白酶有相似的解離動力學,穩定性更高,純度更好,消化更溫和,細胞毒性更低。目前主要應用于細胞培養中,可以在賴氨酸和精氨酸的C末端切割肽鍵,可以替代豬或牛胰蛋白酶(Trypsin)對貼壁細胞的消化解離。生物制藥中,GMP級別的TrypLUS能夠為疫苗生產、病毒載體生產提供高質量和高性價比的貼壁細胞消化解決方案。




逐典TrypLUS消化液優勢

1. DMF備案

2. 非動物來源

3. 室溫貯存,無需胰酶抑制劑,稀釋即可終止

4. 消化溫和,消化后細胞活性高

5. 即開即用,方便快捷

逐典TrypLUS消化液應用案例














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