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牛血清白蛋白在生化實驗中的作用

來源:上海聯(lián)碩生物科技有限公司   2024年05月10日 17:13  

牛血清白蛋白(BSA)在生化實驗中有廣泛的應(yīng)用, 接下來為大家介紹其中兩種作用。
牛血清白蛋白測定蛋白濃度:
按50:1配置BCA工作液。10ulC液(蛋白標準)+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標準液。
再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標準液加入96孔板的第1~8標準孔中,在其他樣品孔中加入10ul待測樣品。分別加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液,室溫放置2小時。用酶標儀測定蛋白濃度:測定A562,依標準曲線算出蛋白濃度。

牛血清白蛋白SDS-PAGE電泳
1、制膠:按比例配制分離膠,緩緩地搖動溶液,使激活劑混合均勻,將凝膠溶液平緩地注入兩層玻璃J中,再在液面上小心注入一層水,以阻止氧氣進入凝膠溶液中,靜置40min。
同前按比例配制濃縮膠,但混勻溶液時不要過于劇烈以免引入過多地氧氣。
吸去不連續(xù)系統(tǒng)中下層分離膠上的水分,連續(xù)平穩(wěn)的注入凝膠溶液,然后小心插入梳子并注意不得在齒尖留有氣泡,靜制60min以上以保證聚合。
2、預(yù)電泳:將聚合好的凝膠安置于電泳槽中,小心拔去梳子,加入電泳緩沖液后低電壓10-20V的預(yù)電泳20-30min。
3、樣品準備:首先計算上樣體積,然后按樣品上樣buffer=4:1的比例加入上樣bufer混勻,沸水10分鐘,冰上5分鐘。
4、加樣:預(yù)電泳后依次加入標準品(Marker)和待分析樣品。(加樣時間要盡量短,以免樣品擴散,可在未加樣的孔中加入等量的樣品緩沖液避免邊緣效應(yīng)。)每個泳道加5ul 。
5、電泳:加樣完畢,選擇80V恒壓進行電泳,電泳直至溴酚藍染料前沿到達兩膠交界處(約20分鐘),更換至100V恒壓電泳,電泳直至溴酚藍染料前沿下至凝膠末端處,即停止電泳(約1小時20分鐘)。

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