測定意義:
生物體內超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導的作用,但積累過多時會對細胞膜及生物大分子產生破壞作用,導致機體細胞和組織代謝異常,從而引起多種疾病。
測定原理:
超氧陰離子與鹽酸羥胺反應生成NO2-,NO2-在對氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成紅色的偶氮化合物,在530nm處有特征吸收峰,根據A530值可以計算樣品中O2-含量。
自備實驗用品及儀器:
天平、水浴鍋、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、lv仿和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體8mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體6mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體6mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:lv仿,自備。
超氧陰離子提取
1. 植物、動物組織:稱取約0.1g樣本,加入提取液1mL,充分研磨,12000rpm,4℃,離心20min,取20μL上清測定蛋白含量,其余上清作為待測樣本。
2. 血清或培養液:直接測定。
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