MV-4-11 人髓性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞

,MV411

貨號(hào)：YJ-h381(STR鑒定)

價(jià)格： 1500.0

規(guī)格： 1*10⁶ 

細(xì)胞介紹

MV-4-11細(xì)胞系由Rovera課題組建立，來(lái)源于一名患有人雙表型髓性單核細(xì)胞白血病（biphenotypic B myelomonocytic leukemia）的10歲男孩的外周血。Interleukin (IL)-3可以獨(dú)立地支持該細(xì)胞長(zhǎng)期生長(zhǎng)，使用10%FBS培養(yǎng)時(shí)則不需要額外添加IL-3。但是，在IL-3和生長(zhǎng)因子Granulocyte/Macrophage Colony-Stimulating Factor （GM-CSF）均處于低濃度的情況下，IL-3會(huì)抑制MV-4-11細(xì)胞的增殖。

生長(zhǎng)因子Granulocyte Colony Stimulating Factor（G-CSF）會(huì)協(xié)同GM-CSF促進(jìn)MV-4-11細(xì)胞的增殖，而單獨(dú)的G-CSF會(huì)短暫刺激該細(xì)胞系。據(jù)文獻(xiàn)[PubMed: 3500218]報(bào)道，間接免疫熒光法檢測(cè)髓性單核細(xì)胞抗原CD15，超過(guò)96%的該細(xì)胞為陽(yáng)性，40~96%為單核細(xì)胞抗原CD4陽(yáng)性，4-11%為單核細(xì)胞抗原CD10陽(yáng)性。

細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：男性，10歲 外周血

2） 形態(tài)：成淋巴細(xì)胞狀，懸浮生長(zhǎng)

3） 含量：>1x10^6 細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1） 收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備IMDM（推薦YJ-0008）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

備注：
a) 該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，傳代時(shí)使用【半換液法】對(duì)細(xì)胞狀態(tài)較為有利，因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進(jìn)行傳代。如你收到的細(xì)胞為15ML離心管發(fā)貨的細(xì)胞，請(qǐng)不要通過(guò)離心的方式收集細(xì)胞，可以直接向培養(yǎng)瓶中添加等體積的新鮮培養(yǎng)液，然后將細(xì)胞吹打均勻后移入兩個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)即可。如你收到的細(xì)胞為T25培養(yǎng)瓶發(fā)貨的細(xì)胞，通過(guò)離心收集細(xì)胞后，添加8-10ml按照要求配置的新鮮培養(yǎng)液然后將細(xì)胞吹打均勻后移入兩個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)即可。

后續(xù)建議您使用【半換液法】進(jìn)行傳代。
b) 細(xì)胞對(duì)血清質(zhì)量較為敏感，我?guī)旖ㄗh您使用進(jìn)口大品牌優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養(yǎng)。
c) 該細(xì)胞對(duì)細(xì)胞密度較為敏感，培養(yǎng)、傳代時(shí)請(qǐng)注意保持細(xì)胞密度在合適的范圍。細(xì)胞接種密度20萬(wàn)個(gè)/mL ，培養(yǎng)時(shí)維持細(xì)胞密度在10萬(wàn)-100萬(wàn)個(gè)/mL

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)胞，可以通過(guò)向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來(lái)維持細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×10^6個(gè)/mL（不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同，）可以維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3） 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

下面T25瓶為例；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)

1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

從2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤(rùn)色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十余年，是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯(lián)系。

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