合成著色劑是指人工化學合成方法所制成的有機色素，因其色彩鮮艷、著色力強、穩定性好、生產成本低等特點廣泛應用于食品工業。我國對食品中添加合成著色劑有著嚴格的限制，《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》（GB 2760—2024）中允許使用的合成著色劑有11種，分別為檸檬黃、日落黃、喹啉黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、you惑紅、赤蘚紅、酸性紅、亮藍和靛藍，并對其允許使用的食品類別和最大使用量做了明確規定。

　　一、色譜柱篩選

　　按照食品安全國家標準《食品中合成著色劑的測定 GB 5009.35-2023》項下分析方法，分別使用4支不同極性C18色譜柱，包括中等級性CAPCELL PAK C18 MGII、中等級性CAPCELL PAK C18 KG、高極性CAPCELL PAK C18 AQ、高疏水性SUPERIOREX II ODS色譜柱，以及鍵合金剛烷基團的CAPCELL PAK ADME-HR色譜柱，分別對用戶提供的11種合成著色劑混合標準品溶液進行分析。

　　如圖1所示，在415nm檢測波長下，5支色譜柱分析結果中只有ADME-HR色譜柱可得到混合標準品中峰1、峰2的良好分析結果，但在610 nm波長下，峰11、峰12未得到基線分離；

　　從C18 MGII、ODS II和C18 KG色譜柱的分析結果中，可以看到混合標準品中峰1和峰2有分離趨勢，但未達到基線分離，同時在520 nm、610 nm波長下各峰間均可達到基線分離。

圖1  色譜柱篩選-GB原方法

　　【色譜條件】

　　色譜柱：CP C18 MGII S5; 4.6×250

　　              CP C18 AQ S5; 4.6×250

　　              CP C18 KG S5; 4.6×250

　　              CP ADME HR S5; 4.6×250

　　              SUPERIOREXII ODS S5; 4.6×250

　　流動相：A，0.02 mol/L 乙酸銨   B，甲醇

　　B(%) 10%(0 min) - 40%(12 min) - 50%(19 min) - 55%(22.5 min) - 95%(24 min) - 95%(33 min) - 10%(34 min) - 10%(42 min)

　　流動速：1.0 mL/min

　　柱動溫：30 ℃

　　檢動測：PDA 415 nm；520 nm；610 nm

　　樣動品：用戶提供

　　進樣量：10 μL

　　二、梯度微調

　　為改善混合標準品中峰1、峰2以及峰11、峰12的分離，嘗試對流動相梯度進行微調，分別降低0-12 min、22.5-24 min梯度斜率，使用CAPCELL PAK C18 MGII、SUPERIOREX II ODS、CAPCELL PAK C18 KG、CAPCELL PAK ADME-HR色譜柱，分別對客戶提供11種合成著色劑標準品進行分析。

　　其中C18 MGII、ODS II色譜柱可得到混合標準品的良好分析結果，結果如圖2、3、表1、2（415 nm分離度）所示，各雜質間分離度均大于1.5，滿足基線分離，但兩支色譜柱分析結果中峰10、11、12出峰位置與參考圖譜中位置反轉。

　　圖2 C18 MGII色譜柱分析圖-梯度微調

　　表1 積分表 C18 MGII 梯度微調

　　圖3 ODSII色譜柱分析圖-梯度微調

　　表2 積分表 ODS II 梯度微調

　　【色譜條件】

　　色譜柱：CP C18 MGII S5; 4.6×250

　　              SUPERIOREXII ODS S5; 4.6×250

　　流動相：A，0.02 mol/L 乙酸銨   B，甲醇

　　B(%) 5%(0 min) - 25%(12 min) - 50%(19 min) - 55%(22.5 min) - 80%(24 min) - 95%(33 min) - 10%(34 min) - 10%(42 min)

　　流動速：1.0 mL/min

　　柱動溫：30 ℃

　　檢動測：PDA 415 nm；520 nm；610 nm

　　樣動品：用戶提供

　　進樣量：10 μL

　　結  論

　　綜上所述，按照食品安全國家標準《食品中合成著色劑的測定 GB 5009.35-2023》項下分析方法，原方法下未能得到所有峰的分離，嘗試對流動相梯度進行微調，使用CAPCELL PAK C18 MGII、SUPERIOREXII ODS色譜柱，均可得到混合標準品的良好分析結果，各雜質間分離度均大于1.5，滿足基線分離。但兩支色譜柱分析結果中峰10、11、12出峰位置與參考圖譜中位置反轉（用戶未提供對照品單標，峰指認通過與標準譜圖對照獲得）。

　　《食品中合成著色劑的測定 GB 5009.35-2023》分析方法推薦用柱

　　F92533

　　CP C18 MGII S5; 4.6×250

　　F41504

　　SUPERIOREXII ODS S5; 4.6×250