天然腔腸素是海腎熒光素酶（Rluc）和Gaussia熒光素酶（Gluc）等多種熒光素酶的作用底物，也是水母發(fā)光蛋白的輔助因子，應用非常廣泛，可用于檢測活細胞中鈣離子濃度，基因報告分析，BRET（生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移）研究，ELISA，HTS，以及組織或細胞中ROS水平的化學發(fā)光檢測。

艾美捷天然腔腸素（#303）參數(shù)：

中文別名 天然腔腸素；腔腸素游離酸

英文別名 Renilla luciferin;Coelenterazine free base

分子式 C26H21N3O3

分子量 423.46

外觀 黃色固體

溶解性 溶于甲醇或者乙醇，不可溶于DMSO

純度 ＞97%(TLC)

溶液配制：

對于所有進行熒光信號檢測的試驗建議溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。建議可用乙醇或丙二醇配制成儲存液（配制濃度可參考文獻推薦）。在使用時需將儲存液用合適的緩沖液稀釋成工作液。

注意：

1、在用蒸餾水或者PBS及其他的溶液進行腔腸素儲存液的稀釋時需排除稀釋液中的氣泡。同時工作液能呈弱酸性，既可以減緩腔腸素的氧化，同時也可防止沉淀的析出。但是弱酸也有可能對后續(xù)熒光強度RLU的檢測造成誤差。

2、腔腸素的工作液不穩(wěn)定，避免過夜保存。

注意事項：

1、保存時若接觸空氣，時間過久會使得腔腸素氧化，造成實驗結(jié)果的不準確性。

2、對于儲存液的制備，較穩(wěn)定的是保存于丙二醇中，同時可加入還原劑如L-抗壞血栓，β-巰基乙醇，DTT，DTE（二硫赤糖醇），或少量的鹽酸。還原劑的存在可能會破壞熒光素酶的結(jié)構(gòu)，也會影響腔腸素的氧化速率。

3、腔腸素在醇類物質(zhì)中的冰凍保存可能會導致沉淀的析出（和濃度有關(guān)），可通過將溶液加熱至50～60℃至其溶解。在使用前請確保眼觀無沉淀。

4、Z適溶劑的選擇取決于多種因素，如還原劑。對于水母發(fā)光蛋白的檢測，可選用β-巰基乙醇，因為此還原劑能夠使水母發(fā)光蛋白更好地與腔腸素作用。但對于Gluc蛋白的檢測，由于蛋白中含有5對二硫鍵，在還原劑的存在狀態(tài)下不能夠檢測到熒光信號。

5、腔腸素在不同溶劑中的溶解特性：（單位：mg/mL）：

溶劑 室溫 60℃(Vortex)

Methanol 100% 46 70

Ethanol 100% 64 196

Propanol 100% 82 204

Butanol 100% 86 180

Propylene Glycol 24 240

b-Mercaptoethanol 160 268

注意：

1）腔腸素的丙二醇溶液在室溫下的溶解度較低，但是在-70℃的狀態(tài)下沒有沉淀析出。

2）腔腸素在β-巰基乙醇中的溶解度在室溫和60℃時都是最高的，但能夠穩(wěn)定存在的時間還有待進一步測試。

6、當使用多孔板進行熒光值的檢測時，建議通過設置對照孔來消除由于腔腸素在工作液中不斷被氧化所帶來的誤差。