在AFM誕生zui初的一段時間,主要應用于電化學、材料科學等領域。近些年,人們逐漸探索著運用AFM對生物樣品進行納米水平的觀測及顯微操作等。與其它顯微鏡相比,AFM的納米量級的高空間分辨率尤為突出,橫向分辨率可達0.1~0.2nm,縱向分辨率高達0.01nm。此外,它不但能夠對生理狀態下的樣品成像,而且可以實時動態地研究樣品結構和功能的關系。故而,AFM成為納米尺度上研究物質結構、特性和相互作用的有力手段。以下主要對這項納米技術在生物醫學研究領域中取得了顯著的成績作一綜述。
1. 形態結構
作為新興的形態結構成像技術,AFM實現了對接近自然生理條件下生物樣品的觀察。這主要由于它具備以下幾個特點:
1).與掃描電鏡和透射電鏡這些高分辨的觀測技術相比,樣品制備過程簡便,可以不需染色、包埋、電鍍、電子束的照射等處理過程;
2).除對大氣中干燥固定后樣品的觀察外,還能對液體中樣品成像;
3).可以根據觀察者的要求,調節樣品所處的溫度、濕度、大氣、真空等觀察條件。目前,AFM已廣泛地應用于細胞及蛋白、多糖、核酸等生物大分子結構的研究中。對一個細胞而言,AFM不但能夠提供長度、寬度、高度等形態方面的信息,還可以滿足人們對膜上的離子通道、絲狀偽足、細胞間連接等細微結構的研究,甚至還可清楚地觀察到膜身的骨架結構。后者對細胞表面與表面下結構相互作用的進一步研究非常有利。
2. 力學特性
由于利用AFM可對掃描各點高度及作用力的測量,這就意味著我們不僅可以獲取生物樣品的表面形態和三維結構,還可以得到其表面硬度、粘彈性、摩擦力等力學特性的表面圖譜
3. 分子間力
將很高的空間分辨率與敏感且準確的力學感應性相結合,是AFM的一個極為顯著的特點。通過將探針連接在彈性系數很小的懸臂上,AFM對力的測量敏感性可達到pn水平。到目前為止,AFM已經廣泛地運用于測量溶液中生物分子間相互作用如與生物反應有關的水合力的研究。利用這些研究結果還有助于對生物分子結構和機械性能進行分析。例如,蛋白質依靠多種非共價作用而保持其結構穩定,通過機械或化學的方法將蛋白伸展后,可以利用AFM直接測量穩定蛋白結構的作用力,并進一步探究這些力對蛋白結構的影響。近幾年AFM對肌蛋白titin的去折疊研究取得的顯著成果即有力地說明了這一點。另外,AFM還能夠測量單個分子間微弱的非共價力。例如測量受體-配體的去結合力,若受體固定在基底表面的話,則將與之對應的配體固定于探針表面,使探針功能化。隨探針-樣品的距離逐漸縮小,懸臂受探體-樣品間吸引或排斥力的作用向接近或遠離樣品的方向偏折,懸臂偏折的zui大幅度反映分離緊密結合兩分子所需的力。在測量中,有可能會受到探針與表面的非特異性相互作用的干擾。因此,有必要認真地選擇對照實驗包括使用未功能化探針;或基底所處的溶液中利用游離的配體封閉受體;調節溶液的離子強度或pH,降低靜電力的干預。除此之外,探針還有可能受溶液粘性牽拉力作用,使撤離速率減慢至記錄數據低于實際的作用力。
4. 顯微操作
通過在納米級水平調控探針的位置和施加力,AFM可以實現對生物分子進行物理操作如切割生物結構,轉移分子至特定位置。在一定的范圍調整施加力,AFM在成像的同時即可對樣品進行操作。施加力的范圍主要由懸臂的力學常數和探針粗細決定。與標準顯維切割技術相比,AFM對目標區域切割、提取等操作具有更準確的特點。
推薦品牌:瑞士Nanosurf
推薦儀器:Nanosurf FluidFM
推薦理由:國內*實現納米流體與AFM定位以及力敏感結合體。
推薦:www.hzs-nanosurf.com
免責聲明
- 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。