跨膜細(xì)胞電阻儀是一種用于測量細(xì)胞層電阻的儀器,廣泛應(yīng)用于研究細(xì)胞間的緊密連接和屏障功能。在實驗過程中,正確操作跨膜細(xì)胞電阻儀并注意相關(guān)事項至關(guān)重要。
一、操作步驟
1.準(zhǔn)備實驗材料:跨膜細(xì)胞電阻儀、細(xì)胞培養(yǎng)器、細(xì)胞培養(yǎng)基、胰酶、離心管、移液器等。
2.細(xì)胞培養(yǎng):將細(xì)胞種植在細(xì)胞培養(yǎng)器上,加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)基。將培養(yǎng)器放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),直至細(xì)胞達(dá)到適當(dāng)?shù)膫鞔壤?/div>
3.裝載細(xì)胞:將細(xì)胞懸液用胰酶消化后,計數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度。將一定數(shù)量的細(xì)胞懸液加入到儀器的上室和下室中,確保細(xì)胞能夠覆蓋整個膜表面。
4.測量電阻:將儀器接入恒溫水浴槽,保持溫度在37℃。使用移液器輕輕攪拌下室中的細(xì)胞懸液,以消除濃度極化現(xiàn)象。記錄初始電阻值。
5.數(shù)據(jù)分析:在一定時間內(nèi)監(jiān)測并記錄電阻值的變化,計算電阻的相對增減率。分析數(shù)據(jù),評估細(xì)胞層的緊密連接和屏障功能。
二、注意事項
1.選擇合適的細(xì)胞株:不同類型的細(xì)胞株具有不同的生理功能和特性,因此在實驗前需充分了解所選細(xì)胞株的特性,以確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
2.維持適宜的培養(yǎng)條件:細(xì)胞的生長和分化受到諸多因素的影響,如溫度、濕度、pH值等。在實驗過程中,應(yīng)嚴(yán)格控制這些條件,以保證細(xì)胞的正常生長。
3.避免污染:細(xì)胞培養(yǎng)過程中容易受到細(xì)菌、真菌等微生物的污染。因此,在操作過程中應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程,定期更換手套,并對實驗器皿進(jìn)行消毒。
4.確保儀器的準(zhǔn)確性:在使用前,應(yīng)檢查儀器是否工作正常,測量電極是否潔凈。測量過程中,應(yīng)避免電極與細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)基直接接觸,以免影響測量結(jié)果。
5.實驗結(jié)果的可靠性:實驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性受多種因素影響,如操作誤差、測量時間、細(xì)胞密度等。因此,在實驗過程中應(yīng)盡量減少誤差,重復(fù)測量并取平均值,以提高實驗結(jié)果的可靠性。
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