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大腸桿菌專用破菌液在大腸桿菌菌種和蛋白表達高通量篩選中的應用

來源:賽爾瑞成(北京)生命科學技術有限公司   2024年04月02日 14:22  

大腸桿菌表達系統是使用很廣泛的蛋白質表達系統,擁有遺傳背景清楚、表達水平高、操作簡單、培養周期短等優點,市售的大約30%的重組蛋白產品都是由大腸桿菌系統生產而來。


應用大腸桿菌表達系統時,為了得到符合科研和產業需求的重組蛋白目標產物,往往需要進行目標蛋白基因或菌種的突變,進行大量且繁瑣的表達菌種和高表達蛋白突變體的篩選工作。大腸桿菌作為宿主菌,表達的蛋白定位為胞內、胞外和周質腔三種。為獲得胞內蛋白或周質腔蛋白,往往需要對大腸桿菌進行破碎。雖然胞外蛋白可以借助信號肽的引導分泌到胞外,但蛋白的分泌效率通常不高,且很多時候,發酵中后期目標蛋白才開始運輸到胞外,導致絕大多數蛋白仍儲存在胞內,所以在進行蛋白制備時,為提高蛋白收率,仍需要進行細胞破碎。因此,破碎細胞是高通量篩選大腸桿菌菌種時必需的環節。


目前常用的破碎細胞的方法有超聲、均質機壓力、溶菌酶、反復冷凍、化學試劑等,但是這些方法不同程度存在破碎效率低、成本高、周期長、細胞破碎不均一等的缺點。賽爾瑞成開發的大腸桿菌專用破菌液,能夠高效、簡便的對大腸桿菌進行細胞破碎,特別適用于需要細胞破碎的高通量篩選。


大腸桿菌高通量.png

★ 產品優勢


1. 原位破菌,使用便捷,篩選成本更低
原位收集菌體,原位破菌,高通量操作。適用于各種型號培養板(如96孔板、48孔板、6孔板等),節省儀器成本、人力成本,節約時間,方便操作。


2. 組成成分溫和
不含還原劑、強變性劑、離子型去污劑等烈性成分,對絕大多數蛋白結構和活性無影響。


★ 使用方法


1. 按常規方法,在培養板(如96孔板、48孔板、24孔板等)中接種培養大腸桿菌,至蛋白表達完成,即可使用孔板離心機離心收菌,棄去上清,盡量去除干凈;


2. 只需將孔板中收集的菌體按照孔板體積的五分之一左右加入破菌液,簡單混勻,置于-20°C以下冰箱,待冷凍結實。需要破菌時取出室溫自然解凍充分,然后按常規方法高速冷凍離心,收取破菌上清和菌體沉淀。





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