大腸桿菌表達系統是使用很廣泛的蛋白質表達系統,擁有遺傳背景清楚、表達水平高、操作簡單、培養周期短等優點,市售的大約30%的重組蛋白產品都是由大腸桿菌系統生產而來。
應用大腸桿菌表達系統時,為了得到符合科研和產業需求的重組蛋白目標產物,往往需要進行目標蛋白基因或菌種的突變,進行大量且繁瑣的表達菌種和高表達蛋白突變體的篩選工作。大腸桿菌作為宿主菌,表達的蛋白定位為胞內、胞外和周質腔三種。為獲得胞內蛋白或周質腔蛋白,往往需要對大腸桿菌進行破碎。雖然胞外蛋白可以借助信號肽的引導分泌到胞外,但蛋白的分泌效率通常不高,且很多時候,發酵中后期目標蛋白才開始運輸到胞外,導致絕大多數蛋白仍儲存在胞內,所以在進行蛋白制備時,為提高蛋白收率,仍需要進行細胞破碎。因此,破碎細胞是高通量篩選大腸桿菌菌種時必需的環節。
目前常用的破碎細胞的方法有超聲、均質機壓力、溶菌酶、反復冷凍、化學試劑等,但是這些方法不同程度存在破碎效率低、成本高、周期長、細胞破碎不均一等的缺點。賽爾瑞成開發的大腸桿菌專用破菌液,能夠高效、簡便的對大腸桿菌進行細胞破碎,特別適用于需要細胞破碎的高通量篩選。
★ 產品優勢
1. 原位破菌,使用便捷,篩選成本更低
原位收集菌體,原位破菌,高通量操作。適用于各種型號培養板(如96孔板、48孔板、6孔板等),節省儀器成本、人力成本,節約時間,方便操作。
2. 組成成分溫和
不含還原劑、強變性劑、離子型去污劑等烈性成分,對絕大多數蛋白結構和活性無影響。
★ 使用方法
1. 按常規方法,在培養板(如96孔板、48孔板、24孔板等)中接種培養大腸桿菌,至蛋白表達完成,即可使用孔板離心機離心收菌,棄去上清,盡量去除干凈;
2. 只需將孔板中收集的菌體按照孔板體積的五分之一左右加入破菌液,簡單混勻,置于-20°C以下冰箱,待冷凍結實。需要破菌時取出室溫自然解凍充分,然后按常規方法高速冷凍離心,收取破菌上清和菌體沉淀。
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