SAECs（小氣道上皮細胞，Catalog: CC-2547）是藥物發現中靶點鑒定和驗證的重要模型。在本應用中簡要總結了利用 RNPs、384 孔 Nucleofector™ 系統（Catalog: AAU-1001）和 P3 原代細胞 384 孔 Nucleofector™ 試劑盒（Catalog: V5SP-3002）對 SAECs 進行自動陣列 CRISPR 篩選的工作流程。

隨著系統生物學與交叉學科方法的應用，要求細胞和系統模型越來越接近體內細胞的功能。這就意味著將來的細胞轉染多數會是原代細胞的轉染。而傳統的方法很難成功轉染原代細胞。另外即使使用細胞系做為系統模型，傳統的方法也難重復出好的細胞轉染效率與成活率。Nucleofector技術就從根本上解決這個問題,無論是原代細胞、干細胞、還是細胞系,它每次都可重復出很高的轉染效率。1998年，Nucleofectorm技術開發成功，2001年上市，是龍沙在市場上第一個有效的、非病毒介導的、用于原代細胞與難轉細胞系的轉染方法。現在Lonza還在繼續不斷改革創新,為研究者推出更多更好的新產品。

原理

Nucleofector™/技術是一種基于通過施加電脈沖在細胞膜中瞬間產生小孔,綜合各種Nucleofector™程序和細胞類型特異性電轉試劑,使核酸底物不僅可以輸送到細胞質,還可以通過核膜進入細胞核。這使得細胞最高轉染效率可達99%,并使轉染成功不依賴于細胞的增殖分裂。