皖儀科技離子色譜助力醫療健康檢測

引言：胱氨酸(Cystine）是人體必需的氨基酸，能協助皮膚的形成，且對解毒作用很重要，借由減低身體吸收銅的能力，胱氨酸保護細胞免于銅中毒。當它被代謝時，會釋放硫酸，而硫酸會與其他物質產生化學作用，增加整個代謝系統的解毒功能。此外，它輔助胰島素的供給，胰島素是人體利用糖和淀粉所必需的。也能促進細胞氧化還原，使肝功能旺盛，促進白細胞增生，阻止病原菌發育。但過量服用會有副作用，主要臨床表現為尿路結石。

胱氨酸尿（cystinuria）指尿中有大量胱氨酸，是一種比較常見的遺傳性疾病，由腎小管胱氨酸轉運缺陷引起。任何年齡均可發生，兒童多見。本病多易形成尿路結石，結石一般在膀胱中形成，臨床常表現為腎絞痛、血尿、發熱、尿頻、尿急和尿痛、腎功能不全等。本病尚無根治方法，多采取對癥治療，主要防治結石形成及其并發癥。

尿中過量胱氨酸可通過硝普鹽氰化物試驗檢出。色譜法和電泳可進一步明確診斷結果，提供準確數據。色譜法常見測試胱氨酸的方法有液相色譜-質譜法等，本次采用的是離子色譜測試尿液中的胱氨酸。

1 實驗方法

1.1 測試條件

儀器：IC6600系列離子色譜儀配置柱后衍生模塊

色譜柱：陽離子分析柱

柱溫：30℃；

流速：分析泵流速：0.3mL/min；

柱后堿液流速：0.3mL/min

進樣量：25μL；

檢測器：安培檢測器

檢測模式：脈沖積分-金電極，AAA，氨基酸

1.2 實驗試劑

淋洗液：甲烷磺酸溶液梯度淋洗；

柱后堿液：300mM氫氧化鈉溶液：精密移取15.7mL50%氫氧化鈉溶液，加入裝有超純水的1000mL塑料容量瓶中，加超純水定容至刻度，過濾，超聲，加氮氣保護；

標樣：L-胱氨酸；

樣品：尿液；

標準儲備溶液：精密稱取胱氨酸0.1000g至100mLPMP材質塑料容量瓶中，加1mL鹽酸使其溶解，再加水定容至刻度，混勻即得。（濃度為1000mg/L）

1.3 標準曲線的制備

分別精密移取0.025mL、0.05mL、0.10mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL標準儲備溶液，置于6個100mL容量瓶中，加超純水定容至標線，混勻，即得。標準曲線濃度梯度表見表1；

表1 標準曲線濃度梯度表

1.4 樣品溶液配制

正常尿液前處理：精密移取正常尿液1mL至100mL容量瓶中,加1mL鹽酸使其溶解，再加水定容至刻度，搖勻即得。樣品過RP柱以及濾膜后進樣分析。

模擬高胱氨酸病人尿液前處理：模擬濃度分別為300mg/L、600mg/L、900mg/L，并在4℃冷藏冰箱中過夜保存后進行測試。精密移取模擬尿液1mL至100mL容量瓶中，加1mL鹽酸使其溶解，再加水定容至刻度，搖勻即得。樣品過RP柱以及濾膜后進樣分析。

2 測試結果

2.1 空白測試

在測試前確保儀器穩定以及系統已經沖洗干凈，需要進行空白實驗，按照“1.1“項測試條件進行測試，得到梯度空白測試圖譜和純水測試圖譜，由圖可見，空白測試圖譜與純水測試圖譜中均沒有出現干擾。梯度空白測試圖譜見圖1，純水測試圖譜見圖2。

圖1 梯度空白測試圖譜

圖2 純水測試圖譜

2.2 標曲測試

標準曲線系列濃度見表1，按照1.1的測試條件進行測試，得到標準曲線譜圖多點重疊譜圖如圖3，待測離子在該色譜條件下標準曲線線性均大于0.999，線性良好，線性方程如下表2。

圖3 標準曲線譜圖多點重疊色譜圖

表2 線性方程

2.3 精密度測試

按照“1.1”項色譜條件，分別連續注入數針0.5mg/L、5mg/L、20mg/L胱氨酸標準溶液進樣分析，測得樣品圖譜見圖4、圖5、圖6。精密度測試數據見表3。

圖4 0.5mg/L標準溶液連續6針重復性圖譜

圖5 5mg/L標準溶液連續6針重復性圖譜

圖6 20mg/L標準溶液連續6針重復性圖譜

表3 樣品連續3針測試數據

2.4 樣品測試

按照“1.1”項色譜條件，連續注入數針樣品溶液和模擬樣品溶液（模擬600mg/L尿液樣品）進樣分析，樣品未檢出胱氨酸，樣品重復性譜圖見圖7。模擬600mg/L尿液樣品樣品重復性譜圖見圖8。模擬600mg/L尿液樣品樣品重復性結果及回收率見表4。

圖7 樣品連續6針測試重疊色譜圖

圖8 模擬600mg/L尿液樣品連續6針重復性圖譜

表4 模擬600mg/L尿液樣品樣品重復性結果及回收率

3 結論

本次實驗采用離子色譜脈沖安培-柱后衍生法測試尿液中的胱氨酸，測試方法簡單，穩定且不受干擾，運行時間短且重復性好，回收率滿足測試要求。