一，宿主DNA殘留控制的法規(guī)要求

隨著生物醫(yī)藥行業(yè)的快速發(fā)展，越來越多的生物制品開始服務(wù)于人類健康，治療性抗體藥物、細(xì)胞治療、病毒載體疫苗等需求日益龐大。不同于傳統(tǒng)口服類藥物，大量生物制品通過注射等給藥方式直接進(jìn)入體內(nèi)，因此更需要嚴(yán)格的質(zhì)量監(jiān)管來保證生物制品的安全性和有效性。宿主核酸的殘留因其可能帶來的傳染性或者致瘤的風(fēng),險(xiǎn)而被作為生物制品安全監(jiān)管中的重要一項(xiàng)。WHO及世界各國(guó)對(duì)宿主核酸的殘留都有嚴(yán)格的規(guī)定如疫苗及治療類生物制品的DNA殘留量通常控制在100pg/劑量以下，部分產(chǎn)品甚至要求DNA殘留量不高于10pg/劑量。因此，解決宿主核酸的殘留是生物制品生產(chǎn)過程中必須面對(duì)的問題。全能核酸酶是一種來源于SerratiaMarcescen的基因工程酶，它可以降解所有形式的DNA和RNA，包括單鏈、雙鏈、線狀、環(huán)狀、天然以及變性的核酸，將它們消化成3-5個(gè)堿基長(zhǎng)度的5'-單磷酸寡核苷酸，且不具有堿基識(shí)別特異性。因此，在一些藥物的生產(chǎn)工藝中常使用全能核酸酶去除殘留核酸，如能有效去除疫苗樣品、細(xì)胞和基因治療病毒樣品及重組蛋白藥物中的核酸污染，降低核酸殘留毒性風(fēng)險(xiǎn)，提高產(chǎn)品安全性;另外，在蛋白分析樣品制備、改善重組蛋白純化工藝、提高蛋白產(chǎn)量、細(xì)胞凍存等方面也可通過使用全能核酸酶處理核酸來達(dá)到理想實(shí)驗(yàn)效果。

二，常規(guī)全能核酸酶在工業(yè)生產(chǎn)中的限制

基于此，常使用全能核酸酶應(yīng)用于藥物開發(fā)生產(chǎn)工藝流程中來去除核酸污染。如在AAV病毒生產(chǎn)中，經(jīng)宿主細(xì)胞大量擴(kuò)增，在細(xì)胞裂解后，往往需要加入全能核酸酶來去除核酸污染，同時(shí)可以降低粘樣品粘稠度，便干后續(xù)上柱純化，但在此過程中，鹽是各種純化方案的重要組成部分，鹽濃度的提高可有效地減少AAV病毒顆粒的聚集，提高AAV病毒顆粒產(chǎn)率。因此常使用含有較高鹽濃度的buffer(400-500mM)來提高病毒收率，而常規(guī)版本全能核酸酶的酶活會(huì)隨著鹽濃度升高而急劇下降，實(shí)際使用中，常需要通過增加酶的用量或延長(zhǎng)孵育時(shí)間來提高純化效果，但這無疑增加了成本和工藝復(fù)雜度。

為更好滿足高鹽環(huán)境對(duì)全能核酸酶的活性要求，逐典生物依托酶改造技術(shù)平臺(tái)，通過A1設(shè)計(jì)極大拓寬全能核酸酶產(chǎn)品的最適催化鹽濃度范圍，終產(chǎn)品在150-900 mM鹽濃度范圍內(nèi)有效，超出客戶預(yù)期，是生物藥工藝流程中去除核酸污染的理想選擇!

三，逐典耐高鹽全能核酸酶優(yōu)勢(shì)

1.更高鹽耐受度

當(dāng)鹽離子濃度在600~700mM時(shí)，初代全能核酸酶幾近失活，而SAN仍能保持較高活性。

圖1.不同鹽濃度下耐高鹽全能核酸酶(SAN)與初代全能核酸酶活性對(duì)比

2. 高效核酸降解力

同對(duì)照組相比，添加SAN后能夠有效去除核酸殘留。

圖2 加入SAN 前后的消化效果圖

四，逐典耐高鹽全能核酸酶用途

1.疫苗和病毒樣品制備中高鹽環(huán)境下DNA污染的去除

2.與細(xì)胞或細(xì)菌裂解液配合使用，去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性，提高蛋白質(zhì)產(chǎn)量。

3.減少存放的外周血單細(xì)胞(PBMC)的結(jié)塊現(xiàn)象

4.降解核酸，利于不可溶性蛋白復(fù)性前高質(zhì)量包涵體制備。

5.有效去除帶負(fù)電荷的核酸對(duì)雙向SDS-PAGE蛋白樣品的影響，改善蛋白質(zhì)分離效果，增強(qiáng)2-DE分辨率

五，客戶應(yīng)用案例