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【微課堂】自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑核心性能淺析

來源:浙江泰林生物技術股份有限公司   2024年03月22日 15:33  


壓力蒸汽滅菌因其高效、適用范圍廣等特點,廣泛應用于醫療、制藥等行業。壓力蒸汽滅菌效果需通過驗證來確認。2020版《中國藥典》指出,生物指示劑的被殺滅程度,是評價一個滅菌程序有效性最直觀的指標。


圖1:自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑
應用場景-壓力蒸汽滅菌鍋驗證



生物指示劑可分為載體型,芽孢懸液和自含式三種。其中自含式生物指示劑自帶培養基,可在普通環境下接種,使用非常方便。
本文就泰林自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑產品的特點及核心性能進行探討。

圖2:泰林自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑結構圖

培養基性能




培養基性能包含無菌性能和恢復生長性能兩方面,無菌性能不合格可能產生假陽性,而培養基恢復生長性能不合格可能導致假陰性,影響滅菌驗證結果判斷。無菌性能要求生物指示劑內含的培養基培養后仍呈陰性;恢復生長性能要求生物指示劑內含恢復培養基經過滅菌后接種不大于100cfu的嗜熱脂肪地芽孢桿菌,置于55~60℃培養箱培養48h,應呈陽性結果。
圖3:指示劑培養結果(紫色為陰性  黃色為陽性)
菌種




國內外法規均指出,嗜熱脂肪地芽孢桿菌(Geobacillus stearothermophilus)可以用來監測壓力蒸汽滅菌效果。該菌種營養細胞呈長桿狀、圓端,多數為單個、少數成對或鏈狀排列,細胞壁為革蘭陽性結構,芽孢呈橢圓或柱狀,芽孢無致病性、對壓力蒸汽的抗力非常強。
芽孢率




根據2020版中國藥典》9207 <滅菌用生物指示劑指導原則>的要求,生物指示劑的芽孢含量應在90%以上。可將生物指示劑的載體置于適量的稀釋液中通過攪拌、渦旋、超聲波(振蕩器)、離心,或其他適宜的方法方法處理,獲得芽孢懸液,再通過芽孢染色觀察視野中芽孢和菌體的比值進行判斷。

圖4:顯微鏡下芽孢染色圖

總芽孢數




生物指示劑的總芽孢數應在標示值的50%~300%。可將紙片載體從初級包裝中取出,置于適量的稀釋液中,紙質載體通過攪拌、渦旋、其他不易破碎的載體通過超聲波(振蕩器)、反復振搖,或其他適宜的方法處理,再95~100℃熱激活處理15min后轉移至0~4℃的冰水浴中迅速冷卻至室溫,用滅菌純化水進行10倍系列稀釋,采用傾注法或涂布法進行芽孢計數。
抗性(D值)




生物指示劑對滅菌過程的挑戰必須超出物品的微生物負荷量及耐受性,以保證滅菌程序有更大的安全性。一般來說,生物指示劑的抗性用D值來表示。D值是指將試驗微生物殺滅90% 所需的滅菌時間或滅菌劑量。自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑需使用抗力儀進行D值測定,通過陰性分數法或殘存概率法計算其D值,滅菌溫度一般為121℃,D值應處于1.5min~3min的范圍內。
圖5:泰林壓力蒸汽滅菌生物指示劑抗力儀
培養耐受性




自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑需在55℃~60℃下培養,在必需的培養周期內,培養基的揮發難以避免。
市場上不少自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑培養前需使用封口膜或其他封口材料對透氣孔進行封堵,否則培養周期內培養基迅速蒸發,培養結果難以觀察。
故培養耐受性也是自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑不可忽視的核心性能。
圖6:不同廠家的自含式生物指示劑培養基蒸發率測試
性能優勢


①二段式組合帽塞,培養48小時水分揮發不足10%,解決了培養不耐受的難題;
②優良透析紙選材,兼顧有效阻菌性與高透氣性;
③培養基性能、芽孢率、芽孢含量、D值經過多次驗證和測試均符合要求;
④高透明度瓶體,便于觀察,結果判斷準確;
⑤含化學指示劑標簽,滅菌后差異明顯,便于分組判斷使用方便。

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