隨著生物醫藥行業的蓬勃發展，利用生物技術制備的產品安全性更加備受關注，其中宿主核酸的控制與去除是至關重要的。一般的生物制品使用全能核酸酶即可去除宿主核酸，但一些廣泛應用于基因及細胞治療領域的生物制品制備和純化工藝需要在較高鹽濃度進行，需要高鹽條件下具有高活性的核酸酶。上海逐典成功開發的耐鹽核酸酶產品，在600-700mM時仍保持較活性，可以更高效、低成本的去除宿主核酸。

一，宿主DNA殘留控制的法規要求

生物制品在生產過程中通常會使用工程細胞（菌）作為宿主。宿主的核酸殘留，特別是DNA殘留會引入免疫原性、致瘤性、感染性、干擾代謝等潛在的安全風險，因此各國藥品監督管理機構對生物制品的宿主核酸殘留量都有著嚴格的限度控制。

各國法規對不同生物制品的宿主核酸殘留控制限度要求不同，殘留量一般控制在0.1-10ng/劑，如有殘留片段大小的限制要求，一般控制在200 bp以下。如《中國藥典》（2020版）規定，疫苗類宿主DNA殘留一般控制應在0.05-10ng/劑。《體內基因治療產品藥學研究與評價技術指導原則（試行）》中建議：“如有可能，建議盡量將殘留DNA控制在10ng/劑以內，DNA殘留片段的大小控制在200bp以下。”美國FDA頒布的《Chemistry, Manufacturing, and Control (CMC) Information for Human Gene Therapy Investigational New Drug Applications (INDs)》中要求宿主DNA殘留需控制在低于10ng/劑，并且DNA大小需小于200 bp。

二，《中國藥典》（2020版）部分生物制品殘留DNA限度要求

三，宿主DNA殘留控制面臨的挑戰

來源于粘滯沙雷氏菌的非特異性核酸酶，如SuperNuclease等，已廣泛應用于上市藥品生產過程中的宿主核酸控制。雖然在生理鹽條件下的體外水解實驗中，這類酶可以迅速水解魚精DNA或小牛胸腺DNA，生成小于8nt的寡核苷酸產物，但是在復雜的工藝條件下使用仍面臨著眾多挑戰。例如：

*宿主DNA通常以染色質的形式存在，且被包裹于含有宿主細胞碎片的復雜基質中，有時需要在高于生理鹽濃度的鹽離子中才能使DNA和蛋白質有效分離。

*AAV等一些病毒載體易發生聚集，在低鹽條件下穩定性差，需要在中、高鹽的緩沖液中才能保證其活性。因此需要核酸酶在中、高鹽的條件下具有高活性，保證病毒載體的回收率。

*在純化工藝環節中，如利用高鹽洗脫的層析樣品中的宿主細胞核酸含量偏高，需要采取相應措施降低宿主核酸含量。

除此之外，傳統核酸酶的活性會隨著鹽濃度升高而急劇下降，在中、高鹽條件使用這類核酸酶會造成生產成本顯著增加。

四，逐典耐高鹽全能核酸酶優勢

1.更高鹽耐受度

當鹽離子濃度在600~700mM時，初代全能核酸酶幾近失活，而SAN仍能保持較高活性。

圖1.不同鹽濃度下耐高鹽全能核酸酶(SAN)與初代全能核酸酶活性對比

2. 高效核酸降解力

同對照組相比，添加SAN后能夠有效去除核酸殘留。

圖2 加入SAN 前后的消化效果圖

五，逐典耐高鹽全能核酸酶用途

1.疫苗和病毒樣品制備中高鹽環境下DNA污染的去除

2.與細胞或細菌裂解液配合使用，去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性，提高蛋白質產量。

3.減少存放的外周血單細胞(PBMC)的結塊現象

4.降解核酸，利于不可溶性蛋白復性前高質量包涵體制備。

5.有效去除帶負電荷的核酸對雙向SDS-PAGE蛋白樣品的影響，改善蛋白質分離效果，增強2-DE分辨率

六，客戶應用案例