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導(dǎo)讀

上一篇《《中國藥典》0512高效液相色譜法修訂公示稿梳理  梯度延遲體積應(yīng)對(duì)方案》介紹使用島津液相色譜儀截止環(huán)功能和調(diào)整梯度起點(diǎn)功能可以作為一種方式應(yīng)對(duì)方法開發(fā)時(shí)的系統(tǒng)與實(shí)際使用系統(tǒng)之間滯留體積的差異。本篇介紹在溶液制備中出現(xiàn)溶劑效應(yīng)問題如何解決！

l                      溶劑效應(yīng)概念及對(duì)分析的影響

在公示稿“溶液制備”章節(jié)中，提到為減少溶劑峰和色譜峰的畸變，制備供試品溶液和參比物質(zhì)溶液可用流動(dòng)相（或梯度起始比例流動(dòng)相組成）作為溶劑，這是首次在0512通則修訂公示中收載溶劑效應(yīng)解決方式。

溶劑效應(yīng)：樣品注入色譜系統(tǒng)后，兩端靠近流動(dòng)相的目標(biāo)物逐漸擴(kuò)散進(jìn)入流動(dòng)相，中心區(qū)域目標(biāo)物仍溶在原溶劑中，目標(biāo)物進(jìn)入色譜柱后，流動(dòng)相氛圍中的目標(biāo)物以正常速度被洗脫，溶劑氛圍中的目標(biāo)物因強(qiáng)溶劑洗脫，移動(dòng)速度快，樣品在空間上開始分裂，即樣品溶劑的洗脫強(qiáng)度強(qiáng)于流動(dòng)相強(qiáng)度而導(dǎo)致的色譜峰展寬，分叉(嚴(yán)重時(shí)分裂)的現(xiàn)象，另外在多個(gè)項(xiàng)目中我們發(fā)現(xiàn)可能會(huì)出現(xiàn)峰形前延、肩峰等現(xiàn)象，而峰形較差會(huì)顯著影響定性和定量指標(biāo)。

在梯度洗脫中，溶劑效應(yīng)對(duì)出峰較早的色譜峰影響更為明顯。溶劑效應(yīng)會(huì)影響峰形，從而影響理論塔板數(shù)、分離度等，應(yīng)盡可能改善該現(xiàn)象！

l                      溶劑效應(yīng)解決辦法

1. 使用初始流動(dòng)相溶解待測(cè)樣品，公示稿首次收載該方法。

2. 減少進(jìn)樣體積，需要注意靈敏度是否滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。

3. 增加柱前管路的體積，需要改配置。

4. Co-injection（共同注入） 進(jìn)樣功能，軟件中可直接選擇該模式，操作簡便。

l                      推薦儀器方案

l                      應(yīng)用案例

1、《中國藥典》2020年版第一增補(bǔ)本 石淋通片【指紋圖譜】

《中國藥典》2020年版第一增補(bǔ)本中，石淋通片增加了【指紋圖譜】和【含量測(cè)定】的項(xiàng)目。在進(jìn)行對(duì)照品夏佛塔苷進(jìn)樣過程中，發(fā)現(xiàn)了較嚴(yán)重的溶劑效應(yīng)，可見以上對(duì)比圖。使用標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣方式，由于溶劑效應(yīng)會(huì)導(dǎo)致峰分叉，采用 Co-injection 進(jìn)樣功能可有效解決此問題。

2、《中國藥典》2020年版  2341第五法  藥材及飲片（植物類）中禁用農(nóng)藥多殘留測(cè)定法

禁用農(nóng)藥相關(guān)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施已經(jīng)有三年，島津技術(shù)團(tuán)隊(duì)在走訪幾十家企業(yè)和藥檢了解到，在出峰較早的化合物存在明顯的溶劑效應(yīng)現(xiàn)象，導(dǎo)致峰形出現(xiàn)分叉（嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)分裂）、肩峰、峰展寬及峰前延等，以上展示是國內(nèi)某藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)使用島津Co-injection功能有效解決了殺蟲脒和久效磷峰形問題。

3、《中國藥典》2020年版  2351第六法  多種真菌毒素測(cè)定法

島津技術(shù)團(tuán)隊(duì)在復(fù)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)中發(fā)現(xiàn)嘔吐毒素存在肩峰現(xiàn)象，使用Co-injection功能有效改善了峰形，并提升了響應(yīng)。

4、杜仲配方顆粒國家藥品標(biāo)準(zhǔn)【含量測(cè)定】

杜仲配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)起初要求理論塔板數(shù)按松脂醇二葡萄糖苷峰計(jì)算理論塔板數(shù)應(yīng)不低于10000，在后續(xù)的修訂稿中修訂為不低于8000。島津技術(shù)團(tuán)隊(duì)在走訪配方顆粒企業(yè)時(shí)，客戶提到即使修訂為8000的要求，對(duì)色譜柱選型要求還是很高，并且耐用性需要完善，島津技術(shù)團(tuán)隊(duì)與客戶共同尋找背后可能存在的原因和解決辦法，最終發(fā)現(xiàn)兩種方案可以解決（Co-injection進(jìn)樣功能或者優(yōu)化有機(jī)相比例為22%），兩種方案任選其一即可。

注：本文中所用數(shù)據(jù)均為島津?qū)嶒?yàn)室特定條件下的測(cè)試數(shù)據(jù)，結(jié)果可能隨實(shí)際情況變動(dòng)

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