活體動物生物發光成像，是將螢光素酶基因整合到細胞染色體DNA上以表達螢光素酶，當外源（腹腔或靜脈注射）給予其底物螢光素（luciferin），即可在幾分鐘內產生發光現象。

而其中最常見也是應用范圍廣泛的就是螢光素鉀鹽，關于螢光素鉀鹽這個產品，近期小編收到了一例客戶咨詢，接下來讓我們一探究竟吧！

Q:您好，有一個實驗上的問題想請教，在使用D-螢光素鉀鹽配置儲備液時，有時會出現渾濁的現象，該怎么解決呢？

A:老師，您好，請問您配置液的濃度一般在多少呢？

Q:25mg/ml至50mg/ml都會有，在25mg/ml時也會出現不溶解的情況。

A:建議您添加少量碳酸鉀溶液溶解，不過可能會延長信號接收時間。

小編溫馨提示

D-螢光素鉀鹽若純度可以達到99%以上，常溫水溶液中溶解度可以達到41mg/mL！市面上很多產品，溶解度只有20mg/mL。甚至還會出現渾濁情況，這從側面反映出其實有效純度是不夠的，很大程度上會影響實驗進程。

關于逐典D-螢光素鉀鹽看這里

逐典D-熒光素鉀鹽，純度高（HPLC>=99%）,溶解度可達40mg/ml以上，擁有較好的水溶性和脂溶性，相較于D-螢光素（游離酸）能更好應用于體外活細胞和體內活體生物發光成像等研究。

客戶之聲

常見問題答疑

Q:D-螢光素鉀鹽的純度是多少？純度大小對實驗有影響嗎？

A:D-螢光素鉀鹽純度≥99 %，螢光素純度越高，相應污染物含量越低，相反則越高，污染物濃度過高將抑制某些酶和細胞中的生物學過程，可能會給實驗結果帶來偏差，并且可能會對實驗動物造成傷害。

Q:D-螢光素鉀鹽溶解度是多少？其溶液穩定嗎？

A:D-螢光素鉀鹽溶解度在40 mg/ml以上，其水溶液短期內存放于-80℃，對實驗效果沒有明顯影響。對于部分條件較敏感的實驗，為了控制實驗中的可變因素，推薦反應液新鮮配制。例如，熒光素酶過低、非最適的反應條件等都需要高質量的底物才能進行反應。

Q:D-螢光素鉀鹽的建議用量是多少？

A:活體成像：以10 μL/g體重確定注射量。每只小鼠接受150 mg D-螢光素鉀鹽/kg體重（如對于體重為10 g的小鼠，需要注射100 μL以提供1.5 mg D-螢光素鉀鹽）。

體外成像：一般使用150μg/ml的工作液用于體外細胞成像。

Tips: 注射方式、動物類型以及體重等都會影響信號的發射，需要適當摸索，待螢光信號達到強穩定平臺期，再用相應儀器進行成像分析。

Q:配置好的D-螢光素鉀鹽溶液如何儲存？

A:工作液現配現用，理想情況下，配置好的儲存液可于-20℃儲存較短時間。如有必要，螢光素溶液可在-20℃儲存長達3周。

Tips: 上述溶液在任何一種溫度長時間貯存下都有可能導致信號退化哦！

Q:螢光素（酶）底物的形式有哪些？

A:分為D-螢光素游離酸、D-螢光素鉀鹽和D-螢光素鈉鹽，由于水溶性高，因此鉀鹽和鈉鹽通常是通用的兩種檢測底物，其中又以鉀鹽作為活體動物檢測使用的主要形式。

Q:如何確定不同模型的峰值信號時間?

A:生物發光信號的動力學具有組織依賴性。建議每5-10min對動物進行一次成像，最多40 min，為每個新模型創建一個動力學曲線。(常見信號峰值時間點在10-15 min左右，螢光反應發光一般在30 min后衰減，3 h后消失。)具體詳見逐典D-螢光素鉀鹽說明書“螢光素動力學曲線制備”。

Q:螢光素底物可以透過血腦屏障嗎？

A:螢光素底物約280 Da，螢光素的水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細胞膜和血腦屏障。

Q:螢光素酶的表達穩定性如何？

A:螢光素酶基因能夠通過穩定篩選等過程插到細胞染色體內，當細胞進行分裂、轉移、分化從而進行持續穩定的表達，螢光素酶的半衰期約為3 h，故只有活細胞才能持續表達螢光素酶。