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簡(jiǎn)單高效利用Lonza Nucleofector電轉(zhuǎn)技術(shù)重編程產(chǎn)生 iPSC
誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 (iPSC) 是通過人工將干細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子引入預(yù)成熟或成熟的體細(xì)胞，從已經(jīng)分化的細(xì)胞類型中衍生的多能干細(xì)胞。
由于其類似ESC的功能，iPSC已經(jīng)作為許多發(fā)育或疾病相關(guān)應(yīng)用的強(qiáng)大工具，幫助科學(xué)家進(jìn)一步確定發(fā)展機(jī)制或疾病發(fā)病機(jī)制，或作為進(jìn)行體外藥物篩選和毒性研究的新型人類疾病模型，并具有成為再生醫(yī)學(xué)新工具的巨大潛力。
科學(xué)家通過病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)或非病毒轉(zhuǎn)染將干細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子引入原代體細(xì)胞中，可以簡(jiǎn)單地在實(shí)驗(yàn)室中產(chǎn)生誘導(dǎo)的PSC。不同組合中使用的典型重編程因子是Oct4，Sox2，Klf4，c-Myc，Nanog和Lin28。
最初，這些重編程因子通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)遞送到體細(xì)胞中，因其隨機(jī)整合的特性和重編程因子的長(zhǎng)期存在對(duì)腫瘤抑制基因的潛在失活可能引起腫瘤生長(zhǎng)，從而降低了它們對(duì)臨床的適用性。
因此，研究人員通過使用非整合 RNA 病毒或游離型載體甚至 mRNA 的非病毒遞送來探索替代方案。 龍沙的 Nucleofector™ 技術(shù)已被證明是用于 iPSC 生成的一種方便、高效且具有成本效益的非病毒替代品，目前正被世界各地的科學(xué)家使用。
Nucleofector™ 技術(shù)已被有效地用于重編程常見的細(xì)胞類型，如人外周血單核細(xì)胞 (PBMC)、真皮成纖維細(xì)胞或 CD34+ 造血祖/干細(xì)胞，以及更罕見的起始細(xì)胞類型，如脂肪干細(xì)胞(點(diǎn)擊此處瀏覽)或角質(zhì)形成細(xì)胞(點(diǎn)擊此處瀏覽)。
下面列出的鏈接和參考資料將提供一些指南，說明使用哪些 Nucleofector™ Kits 將重編程載體轉(zhuǎn)染到這些常用的細(xì)胞類型中。此外，為了設(shè)置您的方案，我們的主要細(xì)胞類型和相應(yīng)的優(yōu)化培養(yǎng)基可用作陽性對(duì)照。
Human PBMCs生成IPSC
| 對(duì)照細(xì)胞 | hPBMCs(Cat# CC-2702) |
| 細(xì)胞特異性培養(yǎng)基 | TheraPEAK™ X-VIVO 15 media (Cat# BEBP02-054Q) |
| Nucleofector 試劑盒 | 對(duì)于4D Nucleofector™ X 單元P3 Primary Cell 4D-Nucleofector™ X Kit(Cat# V4XP-3024)對(duì)于Nucleofector™ 2b系統(tǒng)Human T Cell Nucleofector™ Kit(Cat# VPA-1002) |
| 參考資料或方案 | 案例研究：Lonza L7™ hiPSC Reprogramming and hPSC Culture System（點(diǎn)擊查看）實(shí)驗(yàn)方案\應(yīng)用數(shù)據(jù)\文獻(xiàn)列表：（點(diǎn)擊查看） |
Human Fibroblast生成IPSC
| 對(duì)照細(xì)胞 | Human Dermal Fibroblasts (Cat# CC-2511) |
| 細(xì)胞特異性培養(yǎng)基 | FGM™-2 Media (Cat# CC-3132) |
| Nucleofector 試劑盒 | 對(duì)于4D Nucleofector™ X 單元P2 Primary Cell 4D-Nucleofector™ X Kit (Cat# V4XP-2024)對(duì)于Nucleofector™ 2b系統(tǒng)Human Dermal Fibroblast Nucleofector™ Kit (Cat# VPD-1001) |
| 參考資料或方案 | 實(shí)驗(yàn)方案\應(yīng)用數(shù)據(jù)\文獻(xiàn)列表：（點(diǎn)擊查看） |
Human CD34+造血干細(xì)胞生成IPSC
| 對(duì)照細(xì)胞 | Human Bone Marrow CD34+ Cells (Cat# 2M-101C)Human Cord Blood CD34+ Cells (Cat# 2C-101) |
| 細(xì)胞特異性培養(yǎng)基 | TheraPEAK X-VIVO media |
| Nucleofector 試劑盒 | 對(duì)于4D Nucleofector™ X 單元P3 Primary Cell 4D-Nucleofector™ X Kit (Cat# V4XP-3024)對(duì)于Nucleofector 2b系統(tǒng)Human CD34+ Cell Nucleofector Kit (Cat# VPA-1003) |
| 參考資料或方案 | 案例研究：Generation of ipsc with cord blood cells with 4D-Nucleofector™ System（點(diǎn)擊查看）實(shí)驗(yàn)方案\應(yīng)用數(shù)據(jù)\文獻(xiàn)列表：（點(diǎn)擊查看） |
Human Bone Marrow Mononuclear Cells生成IPSC
| 對(duì)照細(xì)胞 | Human Bone Marrow Mononuclear Cells (Cat# 2S-101D) |
| 細(xì)胞特異性培養(yǎng)基 | TheraPEAK X-VIVO media |
| Nucleofector 試劑盒 | 對(duì)于4D Nucleofector X 單元P3 Primary Cell 4D-Nucleofector™ X Kit (Cat# V4XP-3024) |
| 參考資料或方案 | 實(shí)驗(yàn)方案\應(yīng)用數(shù)據(jù)\文獻(xiàn)列表：（點(diǎn)擊查看） |
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