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一文教你如何選擇報告基因!

來源:上海瑋馳儀器有限公司   2024年01月03日 18:48  

一,什么是報告基因?

報告基因( reporter gene) 是一種編碼在內源蛋白背景下易被檢測出來的蛋白質或酶的基因。報告基因與目的基因或調控序列相連,通過間接或直接檢測報告基因編碼產物的信號,比如報告蛋白、mRNA、酶等,直觀反映細胞內基因的轉錄活性或表達水平。一般報告基因的特點是無毒、無免疫原性、易于檢測、具有一定的特異性。報告基因編碼產物的半衰期是比較關注的一個關鍵點。編碼產物半衰期和報告基因的應用領域息息相關。[1]

那么報告基因該如何選擇呢?在選擇報告基因時一般基于以下幾個原則,對宿主的影響,內源性活性影響以及方法是否成熟等。目前報告基因大致分為四類[2][3],不同的報告基因有著不同的優缺點(表1)。下面就幾種不同的報告基因做出舉例介紹。

二,報告基因的種類及優勢

報告基因類別優勢
無底物發射熒光(如熒光蛋白基因)1.相對分子質量小、熒光較穩定、對活細胞無害、檢測方法容易;
2.可以在同一個細胞中檢測到綠色熒光蛋白和藍色突變體
與放射性或熒光底物相互作用(如熒光素酶)1.方便快捷,高靈敏度;
2.線性范圍較大,背景極低,分析方法相對簡單。
轉運為基礎的報告基因(如氯霉素乙酰轉移酶基因)1.表達產物比較穩定;
2.氯毒素乙酷轉移酶在真核細胞中的本底很低,結果重現性好,且靈敏度高,是真核基因表達調控研究中最早使用的報告基因之一。
膜錨定受體或抗體(如膜錨定熒光素酶)1.高靈敏度;
2.檢測信號在細胞外不受細胞內源物質影響。

熒光素酶報告基因
在生物醫藥行業最主要的報告基因為熒光素酶報告基因。最常見的熒光素酶 (luciferase)基因來源于螢火蟲。螢火蟲螢光素酶在ATP、氧氣和Mg2+存在條件下,催化螢光素的氧化羧化,釋放出光信號,這是任何已知生物發光系統中效率較高的發光反應,因而被設計用來檢測和定量哺乳動物細胞中螢火蟲螢光素酶的表達。相對于其他報告基因,螢光素酶具有諸多優勢:檢測靈敏度高,型號穩定性好,操作方便。

CHASELECTION逐典螢光素酶報告基因檢測試劑盒旨在準確、靈敏、高效地測定螢火蟲螢光素酶活性,應用高通量藥物篩選、藥物活性檢測、大規模啟動子功能測定、信號通路等研究。

逐典螢光素酶報告基因




針對報告基因檢測不同的側重需求,逐典推出了3種檢測系統。



逐典螢光素酶報告基因特點:

1. 檢測靈敏度高,信號穩定性好

HEK293-NFK B-LUC細胞加入梯度稀釋的TNF 在37C、5%CO條件下刺激6小時后,分別用增強型、超敏型、穩定型檢測試劑進行信號檢測。



2. 操作方便

僅需將底物和螢光素酶檢測緩沖液混合后直接加入到細胞即可。



3. 穩定性好

同時在10次反復凍融實驗中,逐典全系列報告基因檢測試劑盒顯示出較強的穩定性。




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