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指南 | Lonza 電轉條件優(yōu)化指南及常見問題

來源:上海瑋馳儀器有限公司   2023年12月19日 11:34  

本期我們將為您提供優(yōu)化 4D-Nucleofector™ X 單元的 Nucleofection™ 條件的指南,及有關該主題的常見問題。

Q

Nucleofector™ I 或 II 條件是否與 4D-Nucleofector™ X 單元兼容?

4D-Nucleofector™ 系統(tǒng)基于升級后的 Nucleofector™ 技術,并具有以下主要改進:

兩種 Nucleofection™ 體系(20ul和100ul),且實驗條件可以互相轉移

Nucleocuvette™ 由導電聚合物而非鋁組成,提高了細胞活力

簡化的 4D-Nucleofector™ 試劑

更廣泛的程序來微調您的優(yōu)化

由于這些差異,為 Nucleofector™ I 或 II 設備推薦的解決方案對 4D-Nucleofector™ 系統(tǒng)無效。然而,在 4D-Nucleofector™ X 單元上運行優(yōu)化是一個潛在改善 Nucleofection™ 結果的佳機會。

Q

我可以優(yōu)化哪些參數?

在 Nucleofection™ 優(yōu)化中,最重要的參數是 Nucleofector™ 試劑和程序。


Q

我應該使用什么底物進行優(yōu)化?

無論您感興趣的底物(質粒、siRNA、蛋白質或化合物)如何,我們始終建議使用我們的 pmaxGFP™ 載體進行優(yōu)化。使用 pmaxGFP™ Vector 進行優(yōu)化消除了許多變量,例如底物制備的性質和質量以及分析時間。

Q

我應該以什么 Nucleofection™ 體系進行優(yōu)化?

4D-Nucleofector™ X 單元旨在簡化優(yōu)化步驟。我們建議使用 20 μl Nucleocuvette™ Strips 進行優(yōu)化,減少珍貴細胞的消耗。確定最佳條件后,您可以使用相同的方案,通過將細胞數量和底物數量乘以 5 來簡單地切換到 100 μl Nucleocuvette™。

Q

如何優(yōu)化 4D-Nucleofector™ X 單元上的 Nucleofection™ 條件?

首先我們將訪問Lonza 開放的數據庫,查找相關程序及方案。

當您的細胞沒有推薦的方案時,將適用以下三種情況之一:

如果沒有任何可用的建議,則開始第一輪優(yōu)化。幾種 Nucleofector™ 試劑(原代細胞的 P1 至 P5 和細胞系的 SE、SF 和 SG)中的每一種都將使用 15 個不同的程序進行測試。

遵循基本的 4D-Nucleofector™ X 單元方案(如果有)。使用少量的程序 (6–7個) 測試一個或兩個 Nucleofector™ 試劑。

數據庫描述了 4D-Nucleofector™ X 單元的 Nucleofection™ 條件和數據。您可以選擇測試它們或返回前兩個選項之一。

Q

如何進一步改善我的 Nucleofection™ 條件?

一旦從第一輪優(yōu)化中獲得 Nucleofection™ 的結果,您可以使用我們基于 Web 的優(yōu)化表格請求我們的反饋,

參考下方的優(yōu)化策略,可能會改善您的 Nucleofection™ 結果:

在表格中選擇效果好的初始程序(例如 DN-100)。表格中間垂直列出的是第一輪優(yōu)化中描述的 15 個程序。

使用所選程序左側的程序來提高細胞活力(例如 DH-100)。使用右側的程序來提高轉染效率(例如 ER-100)




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