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水產(chǎn)品中呋喃唑酮?dú)埩袅康臏y(cè)定--液相色譜法

來(lái)源:天津市蘭博實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備有限公司   2009年06月30日 15:41  

1.范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中呋喃唑酮?dú)埩袅康臏y(cè)定方法──液相色譜法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)品可食部分中呋喃唑酮?dú)埩袅康臏y(cè)定。

 2.規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn),然而,鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的版本。凡是不注日期的引用文件,其版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
GB/T 6682-1992 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3. 原理

樣品中呋喃唑酮用二氯甲烷提取,蒸發(fā)濃縮提取液,無(wú)水硫酸鈉去除水分,用正己烷液-液萃取除去脂肪及其它雜質(zhì),離心,取下層清液經(jīng)膜過(guò)濾器后用液相色譜儀分離,紫外檢測(cè)器檢測(cè),外標(biāo)法定量。

4. 試劑和材料

4.1  乙腈:色譜純。
4.2  二氯甲烷:色譜純。
4.3  正己烷:分析純,用乙腈飽和。
4.4  85%磷酸:分析純。
4.5  乙腈水溶液:乙腈+水(體積分?jǐn)?shù)為80+20)。
4.6  無(wú)水硫酸鈉:分析純;經(jīng)640℃灼燒4.0h后,貯于密閉容器中備用。
4.7  無(wú)水硫酸鈉柱:200mm×24mmid),內(nèi)裝50mm~100mm高的無(wú)水硫酸鈉。
4.8  呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)品:純度≥99.5%
4.9  呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:稱(chēng)取10.0mg呋喃唑酮,用乙腈水溶液溶解并稀釋定容至50mL棕色容量瓶中,在冰箱中冷藏保存,保存期一個(gè)月。該液1mL相當(dāng)于200μg呋喃唑酮。
4.10  試驗(yàn)用水:符合GB/T 6682一級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)。

5. 儀器和設(shè)備
5.1  液相色譜儀,配有紫外檢測(cè)器。
5.2  高速組織搗碎機(jī)。
5.3  旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
5.3  離心機(jī)。
5.4  振蕩器。
5.5  蒸發(fā)燒瓶,具塞。
5.6  刻度離心管。
5.7  膜孔濾器:0.45μm
6.色譜條件
6.1  色譜柱:C18, 250mm×4.6mmid),粒度5μm
6.2  流動(dòng)相:乙腈++磷酸(體積分?jǐn)?shù)為40+60+0.1)。
6.3  流速:0.8mL/min
6.4  檢測(cè)波長(zhǎng):365nm
6.5  柱溫:室溫。
6.6  進(jìn)樣量:20μL
7. 樣品測(cè)定

7.1  試樣制備
取魚(yú)、蝦、蟹、鱉等水產(chǎn)品可食部分,切成不大于5mm×5mm×5mm的小塊后混勻,經(jīng)高速組織搗碎機(jī)搗碎即可,充分混勻。
7.2  提取
稱(chēng)取搗碎樣品約10g(至0.01g),加25mL二氯甲烷攪拌分散后浸泡15min,在振蕩器上振蕩5min,提取液經(jīng)無(wú)水硫酸鈉柱濾入蒸發(fā)燒瓶中,殘?jiān)謩e用25mL15mL二氯甲烷按上述方法各重復(fù)提取一次,再用15mL二氯甲烷沖洗無(wú)水硫酸鈉柱,并采用洗耳球吹出柱中液體,濾液均濾入同一蒸發(fā)燒瓶中,濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在45℃左右水浴下減壓蒸發(fā)去除溶劑,蒸發(fā)速度控制在每秒一滴。
7.3  凈化
1.0mL流動(dòng)相和1.0mL正己烷溶解殘?jiān)⒊浞窒礈煺舭l(fā)燒瓶,將液體移入離心管中,在4000r/min離心5min,用尖嘴吸管移去上層正己烷層,再向離心管中加入1.0mL正己烷,混勻2min,離心,用尖嘴吸管移去上層正己烷層,下層清液經(jīng)0.45μm膜孔濾器過(guò)濾后進(jìn)HPLC分析。
7.4  測(cè)定
7.4.1  呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)工作液配制
臨用前,取呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,用流動(dòng)相稀釋成濃度為0.01μg/mL~1.00μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。
7.4.2  液相色譜測(cè)定
根據(jù)樣品液中呋喃唑酮?dú)埩袅壳闆r,選定峰高相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品液中呋喃唑酮響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)線性范圍內(nèi)。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品液等體積參插進(jìn)樣進(jìn)行測(cè)定。在上述色譜條件下,呋喃唑酮保留時(shí)間約為5.8min
7.5  空白試驗(yàn)
除不加試樣外,按7.2~7.4步驟進(jìn)行。
8. 結(jié)果計(jì)算與表述
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品液的峰高,按式(1)計(jì)算樣品中呋喃唑酮?dú)埩袅浚?font face="Times New Roman">                       
h-h0×V×1000
C=Cs ×                          ···································
1
                       hs×m
式中:
C──樣品中呋喃唑酮?dú)埩袅浚瑔挝粸槲⒖嗣壳Э耍?font face="Times New Roman">μg/kg
);
h──樣品液中呋喃唑酮的峰高;
hs──標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中呋喃唑酮的峰高;
h0──空白試驗(yàn)的峰高;
Cs──標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中呋喃唑酮的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);
V──樣品液zui終定容體積,單位為毫升(mL);
m──樣品的稱(chēng)取量,單位為克(g)。   
9. 
線性范圍、檢測(cè)限、回收率
9.1  線性范圍
    本方法的呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)工作液線性范圍為0.01μg/mL ~1.00μg/mL
9.2  檢測(cè)限
本方法的檢測(cè)限為1μg/kg
9.3  回收率
本方法回收率為72.8%~96.2%       

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