色譜填料的選擇

來源：北京綠百草科技發(fā)展有限公司 2023年11月25日 11:32

　　一、硅膠基質(zhì)填料

　　1、正相色譜

　　正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其它具有極性官能團(tuán)，如胺基團(tuán)(NH2，APS)和氰基團(tuán)(CN，CPS)的鍵合相填料。

　　由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其它極性基團(tuán)極性較強，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組份的極性大小，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。

　　正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如：正己烷(Hexane)、氯仿(Chloroform)、二氯甲烷(Methylene Chloride)等。

　　2、反相色譜

　　反相色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對較弱的官能團(tuán)的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。

　　樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組份最先被沖洗出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。

　　常用的反相填料有：C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。

　　二、聚合物填料

　　聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等，其主要優(yōu)點是在pH值為1～14均可使用。

　　相對于硅膠基質(zhì)的C18填料，這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。

　　現(xiàn)有的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低。

　　三、其它無機填料

　　其它HPLC的無機填料色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì)，一般僅限于特殊的用途。如，石墨化碳正逐漸成為反相色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性。

　　該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強。石墨化碳可用于分離某些幾何異構(gòu)體，又由于在HPLC流動相中不會被溶解，這類柱可在任何pH與溫度下使用。

　　氧化鋁也可用于HPLC，氧化鋁微粒剛性強，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床，其優(yōu)點是可在pH高達(dá)12的流動相中使用。

　　但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強，應(yīng)用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應(yīng)用。新型氧化鋯基質(zhì)色譜填料也可用于HPLC，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應(yīng)用pH范圍1～14，溫度可達(dá)100℃。

　　由于氧化鋯填料是最近幾年才開始研究，加之面臨的實驗難度，其重要用途與優(yōu)勢尚在進(jìn)行中。

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