透射電鏡簡介:
透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,簡稱TEM),可以看到在光學顯微鏡下無法看清的小于0.2um的細微結構,這些結構稱為亞顯微結構或超微結構。要想看清這些結構,就必須選擇波長更短的光源,以提高顯微鏡的分辨率。1932年Ruska發明了以電子束為光源的透射電子顯微鏡,電子束的波長要比可見光和紫外光短得多,并且電子束的波長與發射電子束的電壓平方根成反比,也就是說電壓越高波長越短。目TEM的分辨力可達0.2nm。
透射電鏡制備注意事項(細胞):
1、細胞數量:> 1*10的6次方;。
2、消化細胞時要注意不要過度,及時用含血清的培養液終止消化;
3、終止消化后,預冷的PBS (pH7.4 )洗細胞1-2次,離心( 1500rpm, 5min) 棄上清(細胞好收集在1.5ml 的EP管中);
4、加入1mL 2.5%戊二醛溶液(需用PBS配制該溶液),可用吸管輕輕吹散細胞,使細胞懸浮于固定液中;
5、4度固定過夜后寄出(寄送時加冰袋,并用2.5%戊二醛溶液將EP管中剩余空間充滿)。
透射電鏡實驗流程:
1、取材
2、固定
3、脫水
4、包埋
5、固化
6、超薄切片機切片(50-60 nm)
7、3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色
8、透射電鏡觀察,拍片
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