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如何輕松獲得精準酶標檢測數據,從選擇EnSight多功能酶標儀開始

來源:上海瑋馳儀器有限公司   2023年11月15日 17:32  

工欲善其事必先利其器,生物制藥從前期藥物靶點確認,高通量篩選,藥物優化,活性功能分析,工藝開發,直至質量控制都離不開酶標儀這一檢測工具。一款優秀的酶標儀,在靈敏度,穩定性,功能多樣性幾個維度如何平衡和把握呢?


酶標儀最常規的功能包含光吸收,熒光和化學發光,這三種應用能夠滿足比較基礎的檢測需求。但它們在原理上有著迥異的差別:光吸收是基于光通過物質時被吸收的定律進行定性和定量分析;熒光是熒光分子中處于激發態的原子核外電子由高能級回到低能級所產生的輻射;化學發光的檢測信號是酶促反應過程中釋放的光子,不需要激發光。因此,若想獲取比較好的檢測結果,三種功能模塊的檢測器需要獨立才是,尤其是化學發光,需要獨立于熒光之外的超敏感檢測模式,放大檢測光子信號、減少空間串擾,才能在實驗中得到更好的檢測窗口







質的飛躍——EnSight超敏化學發光

EnSight這款多模式檢測儀最初的設計理念就是模塊化的光路設計,不同且獨立的檢測器滿足不同應用需求。采用專用超敏感化學發光檢測器以及免光纖的光路,在檢測時更靠近檢測樣品,有效避免相鄰樣本的交叉干擾,也更易于捕捉微弱信號,有效區分背景干擾和樣品信號,相對普通化學發光,靈敏度提升10倍,孔間串擾低0.05%,確保實驗結果的可靠和準確。





EnSight超敏化學發光檢測光路以及與一般化學發光的比較


2020年,中國食品藥品檢定研究院(簡稱中檢院)王佑春團隊在EmergingMicrobes &Infections上發表了重要論文,本文作者開發了SARS-CoV-2抗病毒檢測的PBNA(pseudovirus-based neutralization assays)評價方法。首先作者構建并滴定SARS-CoV-2假病毒;接著對SARS-CoV-2 PBNA體系進行了優化;最終將此PBNA體系可作為疫苗對抑制SARS-CoV-2侵入效果和靶向病毒入侵治療方案的評價方法。


作者全程借助EnSight和Britelite底物進行化學發光檢測:

  • SARS-CoV-2假病毒構建和滴度檢測

  • SARS-CoV-2中和反應檢測方法的建立和驗證



基于整個檢測系統的高靈敏度和穩定性,該方法作為標準SOP下發各省疾控,同時提供給治療藥物開發機構,以評估候選疫苗或藥物的療效。





SARS-CoV-2 PBNA驗證和工作流程


除了基礎的三功能,要實現更多的檢測應用,尤其是藥物研發階段,具有多功能或可擴展性的酶標儀是更好的選擇。


EnSight除具有基本功能高精度四光柵(光吸收、熒光)模塊和超靈敏獨立化學發光檢測以外,還可擴展超靈敏度Alpha檢測功能以及高靈敏時間分辨熒光&高兼容性TR-FRET。


Alpha,讓最費時耗力的ELISA得以解放

說起ELISA,可謂是免疫學中的經典實驗,但是做過的小伙伴都知道,過程“耗時耗力”,加樣,甩板子,洗滌,反復循環,一次實驗耗費大半天時間。那么,到底怎樣才能實現靈敏度又高,流程又短,省時省力的目標蛋白檢測呢?


只需混合無需洗滌的ELISA——Alpha提供解決方案。和ELISA相比,Alpha是為均相檢測,操作十分簡便。可省去費時費力的清洗步驟,無論是總的實驗操作時間,還是試劑準備時間都被大大縮短。







Alpha檢測須配置高強度的激光光源,以激發出供體微珠上足量的單體氧分子。EnSight超靈敏HTS Alpha模塊在配置激光光源和超靈敏PMT的基礎上,又對光源和PMT進行了優化,因此其信噪比更高、檢測速度更快,得到低背景、高靈敏度的信號。再者,易于實現自動化分液操作,非常適合高通量篩選。







技多不壓身——時間分辨熒光(TRF)

稀土元素在受到熒光激發時,發生熒光衰減的周期通常是很長,能達到1-2ms,可以滿足測量要求,因此而產生了時間分辨熒光分析法,即使用長效熒光標記物,在關閉激發光后再測定熒光強度的分析方法。TRF光信號比普通熒光信號較弱,EnSight采用優化的濾光片及專用二向色鏡光路,以盡量保證激發光強度、光透過率及雜信號干擾,以達到更好的檢測靈敏度和信噪比。


EnSight還是一臺細胞成像分析儀

酶標儀一般是通過讀取光強度值這一單一維度來評估樣品信息,但細胞類檢測對數據的更高要求,如細胞數量、生長融合度、細胞形態和增殖、凋亡水平、病毒空斑實驗等。EnSight十八般武藝,樣樣精通。


EnSight具有高速高效細胞成像模塊,采用先進的sCMOS相機以降低信號背景噪音,激光自動聚焦以快速成像,固態光源(LED)以進行短時照明。可以依次進行多通道檢測,一整個384孔板整板生成單色圖像只需大約5分鐘。相比人工計數和分析,可以顯著提高實驗通量以及實驗結果的準確性和穩定性。






EnSight 多模式檢測儀進行成像和空斑計數分析






人工計數和EnSight計數的比較


如虎添翼——智能分析軟件

出色的酶標檢測結果,離不開硬件全程保駕護航,同時更需要一個好的軍師——分析軟件。


EnSight基于工作流程的Kaleido數據采集和分析軟件方便易學,其用戶界面會引導實驗進行,更加輕松自如地設置和運行多技術流程。用戶可根據自己的技能水平和熟練程度設置實驗方案。預制的方案有助于更快啟動實驗,非常適合新手和日常應用。利用該軟件的任務工具箱,可以將任務結合起來創建自定義方案,因此可以在更廣泛的成像應用中快速獲取結果。


集美貌與才華與一身,EnSight多功能酶標儀以一種方式將標記技術與微孔板顯微成像技術整合,為您的研究提供一種真正的正交方法,使您獲得深入見解。


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