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制備液相色譜的實驗步驟

來源:Gilson中國-吉爾森實驗儀器(上海)有限公司   2023年10月25日 14:35  
  制備液相色譜是一種常用的分離和分析方法,適用于分離和純化各種生物分子,如蛋白質、多肽、核酸等。與高效液相色譜相比,它主要用于大量樣品的制備和工業生產,具有更高的分離度和更大的進樣量。
 
  制備液相色譜的分離過程是在高壓下進行的,通常采用固定相和流動相之間的相互作用來實現樣品的分離。固定相通常是硅膠或聚合物顆粒,表面鍵合了不同的官能團,如氨基、羧基、疏水基等。流動相是水或有機溶劑,如甲醇、乙腈等。在分離過程中,樣品溶液通過進樣針注入色譜柱,色譜柱中的固定相與樣品分子相互作用,使不同組分在色譜柱中得到分離。
 
  制備液相色譜的實驗步驟包括以下步驟:
 
  樣品準備:將需要分離的樣品溶液進行過濾和濃縮,以便進行后續的色譜分離。
 
  儀器準備:將所需的儀器和配件準備齊全,如高壓輸液泵、色譜柱、檢測器、進樣針等。
 
  流動相配制:根據所需的分離效果,選擇合適的流動相溶劑,并配制一定比例的流動相溶液。
 
  色譜柱活化:將色譜柱拆開,用少量流動相沖洗并活化固定相,以便樣品分子可以更好地與固定相相互作用。
 
  進樣:將樣品溶液通過進樣針注入色譜柱中,使樣品分子與固定相相互作用。
 
  洗脫:通過泵入流動相,將樣品分子從固定相中洗脫出來,并沿著色譜柱向前移動。
 
  收集:根據需要將各個組分收集起來,以備后續分析或制備使用。
 
  制備液相色譜在蛋白質組學、生物醫藥、環境科學等領域得到了廣泛應用。通過分離和分析,可以獲得各種生物分子在不同條件下的性質和結構信息,為科學研究提供重要的依據。此外,它還可以應用于工業生產中,如藥物、食品、化妝品等領域的生產和質量控制中。

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