數字PCR（dPCR）是一種核酸絕對定量的技術，與傳統的熒光定量PCR技術（qPCR）相比，dPCR擁有可以精確到單個核酸分子的高精準度、適合復雜樣本的高便捷度、且無需標準曲線或參照基因進行對比分析等特點。因此，高靈敏度、絕對定量、高穩定性和更高的抗干擾能力成為數字PCR的4大優勢。

作為最常見的腫瘤之一，胃癌(GC)具有高死亡率，因為當前的檢查方法不能實現早期診斷。核粒梭菌(Fn)主要定居在口腔中，據報道與胃腸道腫瘤的發展有關。迄今為止，關于唾液Fn和胃癌之間的關系知之甚少。該篇來自山東大學齊魯醫院文章確定唾液Fn能否作為診斷胃癌的生物標志物，并探討Fn對胃癌細胞的影響。

實驗方法：通過液滴數字聚合酶鏈反應對2019年1月至2020年12月山東大學齊魯醫院的120例GC患者、31例wei縮性胃炎(AG)患者、35例非AG (NAG)患者、26例胃息肉(GP)患者和20例正常對照(NC)的唾液中Fn的豐度進行定量。進行受試者工作特征(ROC)曲線分析，以評估Fn以及傳統血清腫瘤標志物(包括癌胚抗原(CEA)、糖類抗原(CA) 19-9和CA72-4)的診斷價值。Transwell實驗和傷口愈合實驗評估Fn感染對GC細胞的影響。western blot法檢測上皮間質轉化(EMT)標記物的表達。

★實驗流程：

• 研究人員的樣本收集，120例GC患者、31例wei縮性胃炎(AG)患者、35例非AG (NAG)患者、26例胃息肉(GP)患者和20例正常對照(NC)的唾液樣本的收集，離心后儲存在-80℃。

• 使用凱杰QIAamp Blood Mini Kit試劑盒提取200ul唾液樣本中的基因組DNA，濃度用Qubit 3熒光計測定。

• 使用上海小海龜數字PCR儀進行Fn的測定，設計Fn的探針進行檢測。

• GC細胞的培養，Fn的菌株培養

• 將GC細胞和Fn的菌株共培養，進行感染

• 將感染后的GC細胞進行Transwell分析

• 傷口愈合實驗，感染后的GC細胞進行Transwell分析，感染后用200 μL的移液管jian端進行直線刮擦，模擬傷口，隨后，除去培養基和漂浮細胞，用無血清培養基代替，并捕獲圖像。細胞培養48小時后，再次拍攝圖像。

• Western blot分析，將感染Fn和未感染Fn的GC細胞裂解進行Western blot分析

實驗結果：核粒梭菌(Fn)是一種牙周致病菌，常見于胃腸道腫瘤組織中。在此，研究發現胃癌患者唾液Fn水平升高，可作為胃癌診斷的潛在生物標志物，其診斷能力優于傳統的血清腫瘤標志物。研究還發現唾液Fn水平與胃癌TNM分期和淋巴結轉移呈正相關。此外，實驗在試管內揭示了Fn通過促進上皮-間質轉化過程來促進GC細胞的遷移和侵襲。該發現表明唾液Fn是診斷胃癌的潛在生物標志物。該研究表明唾液中Fn含量可作為診斷胃癌的生物標志物，Fn感染可通過加速上皮間質轉化過程促進胃癌轉移。

該篇研究用的是小海龜數字PCR儀設備進行Fn數字PCR檢測。上海小海龜科技有限公司立足于基因檢測上游儀器、芯片耗材與試劑開發的高新技術企業，其以微流控芯片技術為核心，已成功推出BioDigital 青數字PCR分體機、以及BioDigital • 炎和SCI Digital系列數字PCR全自動一體機，實現了基因檢測與分子診斷前沿技術領域的重大原始材料科技創新和產業化突破。

BioDigital 青--真正的液滴制備全自動PCR

• china第yi張計量評價證書

• 獲得醫療器械注冊

• 兼容超多重技術

• 分體機

性能特點：

• 操作簡單：全封閉自動化液滴制備，上樣、制備無人工操作，設有4℃樣本保存功能

• 使用成本低廉：個位數芯片成本，支持單樣本開機

• 平臺開放：可兼容第三方qPCR Mix

• 高通量：1~96樣，4路熒光

• 液滴數量：＞2萬，有效液滴比例：95%以上

• 有一類醫療器械證，適用于醫院系統