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5個(gè)步驟8個(gè)TIPS助你提高轉(zhuǎn)染效率!

來源:上海瑋馳儀器有限公司   2023年09月06日 17:09  

轉(zhuǎn)染5步驟:

第一步:獲取目標(biāo)細(xì)胞



第二步:混合和結(jié)合



轉(zhuǎn)移至Lonza認(rèn)證的電轉(zhuǎn)杯或電轉(zhuǎn)板條中



第三步:選擇Nucleofector程序,放入電轉(zhuǎn)耗材,按下開始按鈕



第四步:用培養(yǎng)基將電轉(zhuǎn)耗材的細(xì)胞轉(zhuǎn)移出來



第五步:轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)M中。Nucleofectionmm電轉(zhuǎn)后3-8小時(shí)即可檢驗(yàn)



提高核轉(zhuǎn)效率8個(gè)TIPS:

1.準(zhǔn)備好加了新鮮培養(yǎng)基的多孔板,并在實(shí)驗(yàn)前于37°C下預(yù)平衡

2.使用傳代次數(shù)少并具有推薦融合度或密度(對數(shù)生長)的細(xì)胞

3.限制胰蛋白酶暴露時(shí)間,仔細(xì)監(jiān)測細(xì)胞分離情況

4.根據(jù)優(yōu)化方案進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)并使用適量細(xì)胞數(shù);所用細(xì)胞過少可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡率增加

5.采用高質(zhì)量DNA,使用內(nèi)毒素去除試劑盒進(jìn)行純化;請通過測定A260:A280比值檢查各質(zhì)粒制備液的純度

6.室溫下以離心速度80-100×g和方案規(guī)定的時(shí)間進(jìn)行離心

7.離心后加入Nucleofector™溶液,混勻溶液/細(xì)胞沉淀制備成單細(xì)胞懸液,避免對細(xì)胞沉淀進(jìn)行額外操作或用移液器槍頭抽吸

8.Nucleofection™核轉(zhuǎn)后,用核轉(zhuǎn)試劑盒內(nèi)配的一次性移液管在電轉(zhuǎn)耗材中的細(xì)胞頂部加入約500μL預(yù)熱培養(yǎng)基



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