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T7 RNA聚合酶 (1 KU/μL)說明書
產品詳情
T7 RNA Polymerase，即T7 RNA聚合酶，是T7噬菌體DNA編碼的酶，對T7啟動子序列具有高度特異性 。本酶是依賴于DNA的RNA聚合酶，具有 5′→3′的RNA聚合酶活性，可以催化單鏈或雙鏈DNA T7啟動子下游NTP的摻入，合成與T7啟動子下游的模板DNA互補的RNA。
特點
該酶對T7啟動子具有高度特異性，不識別其它生物來源的啟動子。可以識別修飾的核苷酸，例如生物素標記、熒光素標記、放射性同位素、地高xin標記dNTP，用于各種標記RNA的合成，進行下游實驗。
來源：攜帶T7 RNA聚合酶基因的E. coli
分子量：99 kDa
純度：≥90%
比活：1 KU/μL
比活單位定義：在37℃、1小時內使1 nmol的CMP摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個活性單位
存儲緩沖液：50 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，20 mM β-ME，1 mM EDTA，50% 甘油，0.1% (w/v) Triton X-100， pH 7.9
產品包裝規格及組成
| 產品編號 | 產品名稱 | 規格 | 產品組成 | ||
| 10×Transcription Buffer | Mg 2+ (400 mM) | T7 RNA Polymerase (1 KU/μL) | |||
| 78MRNA-1104A | T7 RNA聚合酶 (1 KU/uL) | 50 KU | 150 uL | 100 uL | 50 uL |
| 78MRNA-1104B | T7 RNA聚合酶 (1 KU/uL) | 200 KU | 500 uL | 500 uL | 200 uL |
| 78MRNA-1104C | T7 RNA聚合酶 (1 KU/uL) | 1000 KU | 1.25 ml×2 | 2 mL | 1 mL |
質量控制
1. SDS-PAGE膠檢測僅可見清晰單一的目的條帶，毛細管電泳檢測純度在95%以上；
2. 酶動力學實時熒光法顯示無DNA酶及RNA酶污染。
應用舉例
【RNA 體外轉錄合成 】
1. 在RNase free的離心管中加入右側表格中各組分配制反應體系；
2. 將上述反應液混合均勻，低速離心至管底，37 ℃孵育4個小時。若轉錄本長度小于100 nt，增加反應時間至4-8個小時；
3. 轉錄后取樣品進行凝膠電泳，取樣1 μL稀釋到5 μL，然后用1%的瓊脂糖凝膠進行檢測，以確定轉錄是否成功；
4. 反應完成后，加入DNase Ⅰ（RNase free），37 ℃孵育30 min以去除模板DNA
| 組分 | 體積 |
| DNase/RNase-Free Water | Up to 20 uL |
| ATP/CTP/GTP/UTP (100 mM each) | 2 uL each |
| 10×Transcription Buffer | 2 uL |
| DNA template | 0.5 ~ 2 ug |
| RNase Inhibitor (40 U/u L) | 0.5 uL |
| Inorganic Pyrophosphatase (0.1 U/uL) | 0.5 uL |
| T7 RNA Polymerase (1 KU/uL) | 0.2 ~ 1 uL |
| Mg 2+ (400 mM) | 1 uL |
| Total Volume | 20 uL |
運輸與保存
運輸條件：藍冰/干冰運輸
保存溫度：-20 ℃以下保存
避免反復凍融或頻繁暴露于溫度變化中，shou次使用時建議進行分裝。
產品效期：12個月
注意事項
1. 使用時宜存放在冰盒內或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20 ℃保存；
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作；
3. 產品僅供研究使用。
| 貨號 | 品名 | 規格 | 品牌 |
| 78MRNA-1104A | T7 RNA聚合酶 (1 KU/μL) | 50 KU | BIOHUB |
| 78MRNA-1104B | T7 RNA聚合酶 (1 KU/μL) | 200 KU | BIOHUB |
| 78MRNA-1104C | T7 RNA聚合酶 (1 KU/μL) | 1000 KU | BIOHUB |
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