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PAP(KlenTaq-S 測序酶)說明書

來源:上海起發(fā)生物科技有限公司   2023年08月24日 09:54  

2.png


產(chǎn)品詳情

KlenTaq-S 測序酶是Taq DNA 聚合酶的改造版,為 Taq DNA 聚合酶的大片段,并做了基因突變。本酶具有 5’→3’聚合酶活性,無5’→3’外切酶活性和 3’→5’外切酶活性。相比普通Taq DNA 聚合酶,KlenTaq-S 測序酶具有很強的 ddNTP 的滲入能力,因此其適用于終止法 DNA 測序或焦磷酸解反應(yīng) SNP 分析。

本公司 KlenTaq-S 測序酶是重組表達,并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。

活性定義活性單位指在 72℃下, 1×AM PCR Buffer 130 min 內(nèi)將 10 nmole dNTP 摻入酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。

特點

1.尤其適合 ddNTP 等修飾核苷酸的摻入反應(yīng)

2.相比全長 Taq DNA 聚合酶,本酶比活性有所降低

適用范圍

ddNTP 終止法DNA 測序(一代測序

焦磷酸解反應(yīng)延伸法 SNP 分析

質(zhì)量控制

經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控檢測,確保該產(chǎn)品具有最高的活性和純度。

酶貯存緩沖液

20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5%Tween20, and 50% glycerol.

應(yīng)用舉例

以下反應(yīng)舉例為 50 μl 標(biāo)準(zhǔn) PCR 體系,僅供參考。實際 PCR 條件應(yīng)根據(jù)模板、引物、目的片段大小加以優(yōu)化,確定最佳反應(yīng)條件。

1) 按下表配制反應(yīng)體系

組份

體積/μl

終濃度

10×AM PCR Buffer 1

5

dNTPs2.0 mM

5

0.2 mM

引物 F10 μM

1.5

0.3 μM

引物R10 μM

1.5

0.3 μM

Template

Varable*

/

KlenTaq-S測序酶(5U/μl

0.5

2.5U

ddH2O

Varable

/

總體積

50

/














*模板DNA用量參數(shù)(50 μl反應(yīng)體系):

人基因組DNA100-1000 ng ; 微生物基因組DNA 10-100ng;PCR產(chǎn)物 1 ng-10 ng Plasmid DNA 5-30 ng ; cDNA from RT reaction 1-5 μl 。

2) 按如下條件進行反應(yīng),

95

2-5 min


95

15 sec

25-35 Cycles

55~72

20 sec

72

1kb/min

72

5 min









3) 瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR 產(chǎn)物,或按實驗?zāi)康倪M行后續(xù)操作。


運輸與保存

-20℃可保存 2 年,避免反復(fù)凍融

注意事項

1.PCR 條件和野生型 Taq DNA 聚合酶類似,對特定 DNA 的測序反應(yīng)可能需要優(yōu)化。2.本酶擴增能力較野生型 Taq DNA 聚合酶有所降低,PCR 產(chǎn)量有所降低,不建議用于常規(guī) PCR3.不可用于 Taqman 探針法 q-PCR 濃度5U/uL


貨號品名規(guī)格品牌
78BEA10012-250UPAP(KlenTaq-S 測序酶)250UBIOHUB
78BEA10012-1250UPAP(KlenTaq-S 測序酶)1250UBIOHUB
78BEA10012-5000UPAP(KlenTaq-S 測序酶)5000UBIOHUB
78BEA10012-12500UPAP(KlenTaq-S 測序酶)12500UBIOHUB







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