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Collagenase I 膠原酶I型說(shuō)明書

來(lái)源:上海起發(fā)生物科技有限公司   2023年08月23日 09:37  

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產(chǎn)品描述

膠原酶(Collagenase)是一種蛋白酶,一種肽鏈內(nèi)切酶,能夠特異性的識(shí)別Pro-X-Gly-Pro序列(該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中,很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中)并切割該序列中性氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽,但膠原酶是唯yi一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶,這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織內(nèi)。

本品來(lái)源于溶組織梭菌(Clostridium histolyticum),是一種酶粗提物,不僅含有膠原酶(更準(zhǔn)確的稱法為梭菌蛋白酶A(clostridiopeptidase A)),能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等,分別能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白,多糖和脂質(zhì),使得本品非常適用于組織消化。

目前商業(yè)化提供的細(xì)菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異,分為四種類型:膠原酶I型,II型,III型和IV型,在應(yīng)用上有所偏向:

1)膠原酶I(Type I Collagenase):含有比較均勻的各種酶活力(包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性)。通常用作上皮細(xì)胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的制備;

2)膠原酶II(Type II Collagenase):含有更高的梭菌蛋白酶活性,通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來(lái)源細(xì)胞的制備;

3)膠原酶III(Type III Collagenase):含有較低的蛋白酶活性,常用于乳腺細(xì)胞的制備;

4)膠原酶IV(Type IV Collagenase):含有低胰酶活性,通常用于胰島細(xì)胞的制備,或者需要維持受體完整性的細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)。

本品為I型膠原酶,≥125 U/mg solid,可用于上皮、肝、肺、脂肪和腎上腺等組織和細(xì)胞的解離。


使用方法

1. 膠原酶儲(chǔ)存液的配制

向每管100 mg的膠原酶中加入100 µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS(Hank’s平衡鹽溶液,含Ca2+、Mg2+),輕輕旋渦震蕩使其充分溶解,制備成1g/mL(即1000×)的儲(chǔ)存液。然后用低蛋白結(jié)合性的0.22 μm的濾膜過濾除菌,分裝成小份量,然后于-20 °C避光凍存。

使用前于冰上解凍,避免反復(fù)凍融。其用于組織和細(xì)胞分散的常用濃度為:0.5-2.5 mg/mL,用于軟骨消化的常用濃度為1-2 mg/mL,需要根據(jù)特定的實(shí)驗(yàn)條件或者參考相應(yīng)的文獻(xiàn)資料確定所需的最佳工作濃度。

2.組織的分離

1. 使用無(wú)菌手術(shù)刀或剪刀將組織切成3-4 mm大小的組織塊;

2. 利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗滌組織塊數(shù)次;

3. 加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS,使其浸沒組織塊,并加入膠原酶至需要工作濃度;

4. 于37℃孵育4-18 h。消化時(shí)使用水平搖床以及用3 mM的CaCl2補(bǔ)充消化可以提高消化效率。

5. 已分散開的細(xì)胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得,收集備用。未wan全解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續(xù)孵育;

6. 利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次;

7. 細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞,利用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器或其他方法計(jì)算活細(xì)胞密度。

8. 于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。

3. 器官灌注

1. 向37℃預(yù)熱的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入膠原酶,另添加3 mM的CaCl2有助于提高分離效率;

2. 按照已優(yōu)化的速率對(duì)相應(yīng)的器官灌注膠原酶工作液;

3. 將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩,從而將已解離的細(xì)胞或小片段組織塊與較大團(tuán)塊分離開來(lái),未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于37℃進(jìn)一步孵育;

4. 利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次;

5. 細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞,利用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器或其他方法計(jì)算活細(xì)胞密度。

6. 于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。

注意事項(xiàng)

1. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 2. 本產(chǎn)品主要用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。


酶活力單位定義

在37℃,pH7.5 的條件下,5 h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當(dāng)于1 µM L-亮氨酸的酶量定義為1個(gè)酶活力單位。

運(yùn)輸及保存條件

     室溫運(yùn)輸。4℃避光保存,2年有效。儲(chǔ)存液-20℃避光凍存。



貨號(hào)品名規(guī)格品牌
LS004194-100mgCollagenase I 膠原酶I型100mgBIOHUB
LS004196-1gCollagenase I 膠原酶I型1gBIOHUB
LS004197-5gCollagenase I 膠原酶I型5gBIOHUB








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