細(xì)胞衰老被認(rèn)為是一種抑制腫瘤的機(jī)制和機(jī)體衰老的根本原因。衰老代表一種停滯狀態(tài)，在這種狀態(tài)下，細(xì)胞仍能存活，但不受血清或培養(yǎng)傳代的刺激而分裂。

細(xì)胞衰老檢測(cè)試劑盒（β-半乳糖苷酶法）提供一種簡(jiǎn)單便捷的操作方法，對(duì)衰老細(xì)胞或組織進(jìn)行染色檢測(cè)；本試劑盒適用于培養(yǎng)細(xì)胞和組織切片的衰老檢測(cè)，但僅染色衰老細(xì)胞，不會(huì)染色衰老前的細(xì)胞(presenescent cells)、靜止期細(xì)胞(quiescent cells)、永生細(xì)胞(immortal cells)或腫瘤細(xì)胞。

艾美捷Biogradetech 細(xì)胞衰老檢測(cè)試劑盒（β-半乳糖苷酶法）

中文名稱：細(xì)胞衰老檢測(cè)試劑盒（β-半乳糖苷酶法）

英文名字：Senescence β-Galactosidase Staining Kit

Biogradetech貨號(hào)：D-AKE3030-100T

規(guī)格：100T

應(yīng)用：細(xì)胞分析

保存建議：請(qǐng)將未開封使用的保存于2-38℃；啟用后的試劑盒，請(qǐng)參考說明書保存各個(gè)組分。

Biogradetech 細(xì)胞衰老檢測(cè)試劑盒（β-半乳糖苷酶法）檢測(cè)方法：

以下方案指-定用于FACS實(shí)驗(yàn)。如果使用較大的盤子，則相應(yīng)地增加數(shù)量和體積

1.細(xì)胞培養(yǎng)：對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心細(xì)胞（700 x g，4°C、 10分鐘）并取出介質(zhì)。將細(xì)胞沉淀重新懸浮在500µl新鮮介質(zhì)（~106個(gè)細(xì)胞/ml）中，并將其轉(zhuǎn)移到24孔板中。如果需要，用感興趣的化合物在37°C/5%CO2下處理細(xì)胞48小時(shí)。對(duì)于粘附細(xì)胞：將細(xì)胞（約5x105個(gè)細(xì)胞/孔）播種在24孔板中，并孵育過夜。培養(yǎng)后，取出培養(yǎng)基，如果需要，加入含有感興趣化合物的新鮮培養(yǎng)基，并在37°C/5%CO2下處理48小時(shí)。對(duì)于對(duì)照細(xì)胞：我們建議單獨(dú)用載體處理細(xì)胞。

2.細(xì)胞染色：對(duì)于懸浮細(xì)胞：處理后，將細(xì)胞收集在無菌Eppendorf管中，離心（700 x g，4C、 10分鐘）收集細(xì)胞顆粒并除去培養(yǎng)基。在500中重新懸浮細(xì)胞顆粒含有1.5µl衰老染料pertube的新鮮培養(yǎng)基。在37°C、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1-2小時(shí)。用500洗滌2Xml洗滌緩沖液。在500個(gè)細(xì)胞中復(fù)蘇細(xì)胞清洗緩沖液并立即使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。對(duì)于粘附細(xì)胞：取出培養(yǎng)基，加入每500含有1.5µl衰老染料的新鮮培養(yǎng)基ml媒體。在37°C、5%二氧化碳條件下培養(yǎng)1-2小時(shí)。孵育后，用500洗滌細(xì)胞2倍洗滌緩沖液。通過胰蛋白酶消化收集細(xì)胞，用500µ洗滌1次，然后將細(xì)胞重懸于500沖洗緩沖液，立即用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。

3.FACS：應(yīng)在FL1通道中測(cè)量信號(hào)。為了確保只有合適的靶細(xì)胞被選通，使用側(cè)散射與FL-1圖。我們建議將未染色的對(duì)照細(xì)胞（即無染料染色）懸浮在洗滌緩沖液中，以建立流式細(xì)胞儀。

3T3細(xì)胞在24孔中以每孔5x105個(gè)細(xì)胞鋪板，在37°C/5%CO2的完-全細(xì)胞培養(yǎng)基中處理4小時(shí)（分別用和不用200nM柔紅霉素；測(cè)試和對(duì)照反應(yīng)）48小時(shí)。取出培養(yǎng)基，用含有衰老染料的培養(yǎng)基代替，并在37°C/5%CO2下孵育2小時(shí)。孵育時(shí)間后，用WashBuffer洗滌細(xì)胞2次，將細(xì)胞胰蛋白酶化，用Wash Buffer洗滌一次，并通過FACS分析。