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對于ELISA試劑盒實驗新手來說，實驗中遇到的一些棘手的問題便無從下手，為大家列出了ELISA試劑盒實驗中一些常見的問題以及解決方法，希望對您有所幫助：
問題序號可能原因解決方法顯色淡，靈敏度偏低。
?。?）試劑盒未充分平衡試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）
（2）樣品不適合做ELISA檢測樣品一般選擇培養上清、血清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測或者需要優化檢測的條件（例如稀釋液的成分）
?。?）酶標板在貯存或洗后拍干時過分干燥防止板過于干燥
（4）包被抗體遭到破壞操作溫和，移液槍不能碰到孔底
?。?）樣本和抗體孵育條件不合適按照說明書條件，建議孵育過程中全程振蕩孵育。
?。?）洗滌浸泡時間過長按照說明書操作。勿人為增加浸泡時間；
（7）偶聯HRP試劑污染棄去試劑，重新配置
?。?）錯誤的稀釋偶聯HRP試劑棄去試劑，重新配置
?。?）TMB底物孵育時間過短，因非人為因素影響，需要優化孵育時間確定合適的孵育時間：人為判定-最高濃度的標準品出現深藍色；S4-5有淡藍色；機器判定620 nm波長下測定OD值達到0.6-0.65
（10）樣本濃度過高或存在基質效應建議做不同稀釋倍數，確認樣本最合適的稀釋倍數。
(11)酶標儀濾光片設置有問題或者波長選擇不對確認儀器設置及選擇正確的波長檢測。
?。?2）酶標板不適合做ELISA不能使用細胞培養板，建議使用ELISA專用高吸附力板子。背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2）
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