AntiFix™ 通用抗原修復緩沖液專為福爾馬林固定石蠟包埋 (FFPE) 組織的熱誘導表位修復 (HIER) 而設計。該緩沖液使用專有試劑催化 FFPE 組織中甲醛交聯的逆轉以恢復抗原反應性。
艾美捷抗原修復液#BTM-22030特征:
在中性 pH 條件下對多種靶標進行出色的抗原修復
簡化 HIER 優化
通過使用酪胺擴增的熒光染色進行驗證
無毒不易燃
用福爾馬林(甲醛)固定組織可以保留組織形態,但甲醛引起的蛋白質交聯可以修飾抗體結合位點或表位,因此免疫組織化學無法再檢測到它們。傳統上,通過使用蛋白酶處理或通過在低 pH 檸檬酸鹽緩沖液或高 pH Tris 緩沖液中加熱載玻片來恢復表位反應性。不同表位的最佳去掩蔽方法各不相同,需要針對不同靶標使用多種緩沖液。
AntiFix™ 通用抗原修復緩沖液經過精心配制,可在中性 pH 條件下為各種靶標提供出色的熱暴露,從而減少對緩沖液優化的需求。它已在使用 HRP 介導的酪胺信號放大的下一代熒光 CF® 染料對 FFPE 組織進行免疫熒光染色時得到驗證。
抗原檢索方案:
注:FFPE切片應烘焙在帶正電的幻燈片上,以避免抗原回收過程中的組織損失
1.使用標準方案對FFPE切片進行除石蠟和再水合。
2.將幻燈片放入Coplin罐子或微波爐保險柜內的幻燈片架中
容器注意:微波會導致玻璃罐破裂。集裝箱應在使用前測試耐熱性。
3.準備1X AntiFix™ 組合1的通用抗原回收緩沖液體積為10X的緩沖液,含9體積的dH2O并完丨全混合。
4.添加足夠的1X AntiFix™ 緩沖液以完丨全覆蓋組織切片。通常,緩沖區被添加到磨砂幻燈片標簽的級別。典型的5載玻片的Coplin玻璃罐的體積為40 mL,24載玻片的體積為200 mL架子染色皿。
5.加熱緩沖區中的幻燈片。使用微波的兩種加熱方法(a)或下面描述多功能炊具(b)。微波是一種由來已久的技術HIER方法。一種帶數字溫度控制的廚房多功能鍋(例如,Instant Pot®)是微波爐的一種方便的替代品。其他加熱HIER常用的方法(如熱水浴或商業傾斜室)。
注:用于紙巾加工的廚房設備應為專用設備用于研究實驗室,根據您的要求貼上生物危害標簽機構或地方法規。
a) 使用微波爐:保持載玻片容器未覆蓋或松散覆蓋以避免壓力積聚。用微波爐加熱幻燈片,直到緩沖液沸騰了。持續監控集裝箱,繼續煮10分鐘,根據需要每30-60秒停止一次微波爐以防止緩沖液沸騰。煮沸10分鐘后,讓容器冷卻至室溫。
b) 使用多功能鍋:放置隨鍋里的炊具。將滑動容器蓋松以避免壓力積聚。將滑動容器放在支架上,確保其固定安全地避免傾倒。把鍋里裝滿水,使水位達到一半向上滑動容器。關上鍋蓋,在98°C下加熱45分鐘沒有壓力。熱處理完成后,小心地移除將容器從鍋中的熱水中取出,冷卻至室溫溫度
6.用dH2沖洗載玻片3次O完丨全移除緩沖區。
7.根據您的方案進行染色。
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