操作步驟
(一)樣品準(zhǔn)備
1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋(如2μl血清加入198μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
(二)檢驗(yàn)方法
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,置37℃反應(yīng)30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調(diào)零,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。
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