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Lonza 4D-Nucleofector電轉百科指南:如何提高電轉染效率?

來源:上海瑋馳儀器有限公司   2023年06月16日 16:30  


在之前的“電轉知識”文章中,我們已經了解了轉染技術的起源與發展,包括各類轉染方式的優缺點


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以及在電轉方法中,Lonza 4D Nucleofector™平臺所能提供的設備型號:

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Nucleofection™ 核轉--5步簡單的操作方案,實現輕松電轉

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那么選擇電轉方法后,該如何提高電轉染效率呢?Lonza電轉技術專家為大家總結了以下八點:

1

準備好加了新鮮培養基的多孔板,并在實驗前于37°C下預平衡

2

使用傳代次數少并具有推薦融合度或密度(對數生長期)的細胞

3

針對于貼壁細胞,需限制胰蛋白酶暴露時間,仔細監測細胞分離情況

4

根據優化方案進行細胞計數并使用適量細胞數;所用細胞過少可能導致細胞死亡率增加,所用細胞過多可能導致細胞電轉效率降低

5

采用高質量DNA,使用內毒素去除試劑盒進行純化;請通過測定A260:A280比值檢查各質粒制備液的純度

6

室溫下以離心速度80-100×g和方案規定的時間進行離心

7

離心后加入Nucleofector™溶液,混勻溶液/細胞沉淀制備成單細胞懸液,避免對細胞沉淀進行額外操作或用移液器槍頭重復抽吸

8

Nucleofection™核轉后,用核轉試劑盒內配的一次性移液管在電轉耗材中的細胞頂部加入約500μL預熱培養基

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輕輕將一次性移液管吸頭置于電轉耗材底部,收集細胞

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將細胞懸液輕輕接種至制備的多孔板中

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請勿重復吹吸混合細胞



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