1。定義 在真核細(xì)胞中絕大多數(shù)的mRNA前體在離開(kāi)細(xì)胞核之前轉(zhuǎn)變成成熟的mRNA，此加工過(guò)程是在被稱(chēng)為拼接體的核糖核酸蛋白復(fù)合物中進(jìn)行的。其主要成分是小核糖核蛋白（snRNPs）和大量的附加蛋白質(zhì)因子。SnRNPs的結(jié)構(gòu)和功能已經(jīng)很明確，但對(duì)hnRNPs了解不多。RNase處理核抽提物，經(jīng)蔗糖梯度離心在、40S處可得到一些顆粒成分。在這些顆粒成分中除了mRNA前體片段外，包含了大約30種不同的能被hnRNPC蛋白單克隆抗體識(shí)別的蛋白。因此，所有能被hnRNP單抗沉淀的蛋白質(zhì)被命名為hnRNP蛋白。根據(jù)它們分子量和雙向電泳中的遷移為特征用字母序號(hào)命名為hnRNP-A1（34kD）到hnRNP-U（120kD），其中hnRNP A和B（hnRNPA／B）蛋白推測(cè)可能是從同一基因編碼得來(lái)的一組高度相關(guān)蛋白質(zhì)。
2．天然抗原與重組抗原的特性 A1抗原是*個(gè)克隆并在細(xì)菌中表達(dá)的hnRNP蛋白。大多數(shù)有關(guān)這一蛋白結(jié)構(gòu)、功能和抗原性的資料是從重組體中得到的。雖然有關(guān)hnRNPA2重組蛋白的資料很少，但有很好的跡象表明重組蛋白的表現(xiàn)與其天然產(chǎn)物在本質(zhì)上沒(méi)有多大區(qū)別。
3．起源和細(xì)胞定位 hnRNP蛋白在進(jìn)化過(guò)程中是非常保守的蛋白，似乎存在于所有的脊椎動(dòng)物的細(xì)胞和組織中，果蠅細(xì)胞中也存在幾種與脊椎動(dòng)物hnRNPA／B相似的蛋白。hnRNP蛋白主要是定位于富含蛋白的細(xì)胞核中。其功能為包裝和加工RNA前體。有證據(jù)表明hnRNP A／B蛋白在剪接中起重要的調(diào)節(jié)作用。此外，這些蛋白可在核與胞漿間穿梭，推測(cè)可能與mRNA的轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)。
4．純化的方法 hnRNP蛋白zui初由HeLa細(xì)胞分離得到，但其他快速生長(zhǎng)的細(xì)胞（人類(lèi)）株（例如MOLT-4 orJurkat）也是很好的來(lái)源。采用肝素—瓊脂糖親和層析一步法可簡(jiǎn)單、快速獲得半純化的hnRNP A／B。簡(jiǎn)要地說(shuō)，核抽提物在20 mmol／LHepes，0．3mmol／L NaCl pH 7．9的肝素瓊脂糖凝膠層析介質(zhì)結(jié)合，先用緩沖液洗柱，然后用20mmol／L Hepes，lmmol／L NaCl pH7．9洗柱，zui后用含6mmol／L尿素的同樣的緩沖液洗脫。尿素洗脫液內(nèi)含約為20倍濃集的hnRNP蛋白。該方法純化的hnRNP蛋白主要是兩種hnRNP-A，hnRNP-B含量較少。隨后采用弱陽(yáng)離子交換介質(zhì)CM-瓊脂糖凝膠進(jìn)行離子交換層析，可獲得高純度的hnRNP-A2。然而，這種純化的蛋白在水樣的緩沖液中幾乎是不溶的，溶解它要加入6mmol／L的脲或1％SDS。hnRNP-A1的純化是用苯瓊脂糖疏水交換層析。作為選擇，也可用單鏈DNA親和層析或密度梯度離心。然而對(duì)大規(guī)模的純化不推薦后一種方法。
5．序列信息 hnRNP-A1和hnRNP—A2的分子量分別為34kD和36kD。兩者都是堿性蛋白質(zhì)，其等電點(diǎn)分別為8．4和9．0，在體內(nèi)以部分磷酸化的形式存在。兩種蛋白高度相關(guān)并且N末端氨基酸有80％以上相同。它們含有兩個(gè)保守的RNA結(jié)合區(qū)域（RBD），也叫做RNA識(shí)別序列（RRM），在C—末端接著一個(gè)富含甘氨酸的片段。hnRNP-B1與hnRNP-A2除了前者在N末端剪切插人了一個(gè)12氨基酸的片段以外，其他*一致。有關(guān)hnRNP-B2的結(jié)構(gòu)目前仍不知。由于抗hnRNP-A2／RA33抗體與兩種hnRNPB蛋白存在廣泛的交叉反
應(yīng)，因而推測(cè)hnRNP-B2可能是mRNA前體在成熟過(guò)程中剪切產(chǎn)生。此外有報(bào)道hnRNP-A1的一段剪切變體（hnRNP-Alb）僅僅是在C末端有50個(gè)氨基酸的插入順序，編碼hnRNP-A1和hnRNP-A2的基因有相似的結(jié)構(gòu)等等均說(shuō)明可能是來(lái)自于同源基因。
到目前為止，有關(guān)hnRNP A／B蛋白資料表明，主要的抗原表位定位于N末端，此類(lèi)區(qū)域含有兩個(gè)RBD區(qū)域。
所有的hnRNPA／B蛋白的特點(diǎn)是都具有同樣的分子結(jié)構(gòu)：N—末端含有兩個(gè)毗鄰的保守的RNA結(jié)合域（RBD），與大多數(shù)RNA結(jié)合域一樣大約為80個(gè)氨基酸組成。黑色條帶代表了每條RBD的兩個(gè)zui保守的序列。C—末端叫輔助域，含有約50％的甘氨酸殘基并與其他富含甘氨酸（如膠原蛋白、角蛋白或EBNA—1）酌結(jié)構(gòu)相一致。hnRNP-B1蛋白除了接近N末端的由選擇性剪切產(chǎn)生的12個(gè)氨基酸的插入片段以外其他與hnRNP-A1*一致。hnRNP-B2的基本結(jié)構(gòu)還不知，但可以假設(shè)是hnRNP-A2另一個(gè)選擇性剪切結(jié)構(gòu)。hnRNP-A1與hnRNP-A2 N—末端中有80％以上的序列相似，富含甘氨酸區(qū)域處大約有40％的序列相似。選擇性的剪切變體hnRNP-Alb，在其富含甘氨酸的輔助區(qū)有50個(gè)氨基酸插入片段。自身抗體的反應(yīng)似乎是直接針對(duì)抗原的N—末端。hnRNP-A2的含有完整的RBD H結(jié)構(gòu)，攜帶很多抗原信息的抗原決定簇結(jié)構(gòu)zui近已獲得鑒定。