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RA33抗體自身抗原

來源:上海源葉生物科技有限公司   2011年09月17日 10:18  

1。定義 在真核細胞中絕大多數的mRNA前體在離開細胞核之前轉變成成熟的mRNA,此加工過程是在被稱為拼接體的核糖核酸蛋白復合物中進行的。其主要成分是小核糖核蛋白(snRNPs)和大量的附加蛋白質因子。SnRNPs的結構和功能已經很明確,但對hnRNPs了解不多。RNase處理核抽提物,經蔗糖梯度離心在、40S處可得到一些顆粒成分。在這些顆粒成分中除了mRNA前體片段外,包含了大約30種不同的能被hnRNPC蛋白單克隆抗體識別的蛋白。因此,所有能被hnRNP單抗沉淀的蛋白質被命名為hnRNP蛋白。根據它們分子量和雙向電泳中的遷移為特征用字母序號命名為hnRNP-A1(34kD)到hnRNP-U(120kD),其中hnRNP A和B(hnRNPA/B)蛋白推測可能是從同一基因編碼得來的一組高度相關蛋白質。
2.天然抗原與重組抗原的特性 A1抗原是*個克隆并在細菌中表達的hnRNP蛋白。大多數有關這一蛋白結構、功能和抗原性的資料是從重組體中得到的。雖然有關hnRNPA2重組蛋白的資料很少,但有很好的跡象表明重組蛋白的表現與其天然產物在本質上沒有多大區別。
3.起源和細胞定位 hnRNP蛋白在進化過程中是非常保守的蛋白,似乎存在于所有的脊椎動物的細胞和組織中,果蠅細胞中也存在幾種與脊椎動物hnRNPA/B相似的蛋白。hnRNP蛋白主要是定位于富含蛋白的細胞核中。其功能為包裝和加工RNA前體。有證據表明hnRNP A/B蛋白在剪接中起重要的調節作用。此外,這些蛋白可在核與胞漿間穿梭,推測可能與mRNA的轉運有關。
4.純化的方法 hnRNP蛋白zui初由HeLa細胞分離得到,但其他快速生長的細胞(人類)株(例如MOLT-4 orJurkat)也是很好的來源。采用肝素—瓊脂糖親和層析一步法可簡單、快速獲得半純化的hnRNP A/B。簡要地說,核抽提物在20 mmol/LHepes,0.3mmol/L NaCl pH 7.9的肝素瓊脂糖凝膠層析介質結合,先用緩沖液洗柱,然后用20mmol/L Hepes,lmmol/L NaCl pH7.9洗柱,zui后用含6mmol/L尿素的同樣的緩沖液洗脫。尿素洗脫液內含約為20倍濃集的hnRNP蛋白。該方法純化的hnRNP蛋白主要是兩種hnRNP-A,hnRNP-B含量較少。隨后采用弱陽離子交換介質CM-瓊脂糖凝膠進行離子交換層析,可獲得高純度的hnRNP-A2。然而,這種純化的蛋白在水樣的緩沖液中幾乎是不溶的,溶解它要加入6mmol/L的脲或1%SDS。hnRNP-A1的純化是用苯瓊脂糖疏水交換層析。作為選擇,也可用單鏈DNA親和層析或密度梯度離心。然而對大規模的純化不推薦后一種方法。
5.序列信息 hnRNP-A1和hnRNP—A2的分子量分別為34kD和36kD。兩者都是堿性蛋白質,其等電點分別為8.4和9.0,在體內以部分磷酸化的形式存在。兩種蛋白高度相關并且N末端氨基酸有80%以上相同。它們含有兩個保守的RNA結合區域(RBD),也叫做RNA識別序列(RRM),在C—末端接著一個富含甘氨酸的片段。hnRNP-B1與hnRNP-A2除了前者在N末端剪切插人了一個12氨基酸的片段以外,其他*一致。有關hnRNP-B2的結構目前仍不知。由于抗hnRNP-A2/RA33抗體與兩種hnRNPB蛋白存在廣泛的交叉反
應,因而推測hnRNP-B2可能是mRNA前體在成熟過程中剪切產生。此外有報道hnRNP-A1的一段剪切變體(hnRNP-Alb)僅僅是在C末端有50個氨基酸的插入順序,編碼hnRNP-A1和hnRNP-A2的基因有相似的結構等等均說明可能是來自于同源基因。
到目前為止,有關hnRNP A/B蛋白資料表明,主要的抗原表位定位于N末端,此類區域含有兩個RBD區域。
所有的hnRNPA/B蛋白的特點是都具有同樣的分子結構:N—末端含有兩個毗鄰的保守的RNA結合域(RBD),與大多數RNA結合域一樣大約為80個氨基酸組成。黑色條帶代表了每條RBD的兩個zui保守的序列。C—末端叫輔助域,含有約50%的甘氨酸殘基并與其他富含甘氨酸(如膠原蛋白、角蛋白或EBNA—1)酌結構相一致。hnRNP-B1蛋白除了接近N末端的由選擇性剪切產生的12個氨基酸的插入片段以外其他與hnRNP-A1*一致。hnRNP-B2的基本結構還不知,但可以假設是hnRNP-A2另一個選擇性剪切結構。hnRNP-A1與hnRNP-A2 N—末端中有80%以上的序列相似,富含甘氨酸區域處大約有40%的序列相似。選擇性的剪切變體hnRNP-Alb,在其富含甘氨酸的輔助區有50個氨基酸插入片段。自身抗體的反應似乎是直接針對抗原的N—末端。hnRNP-A2的含有完整的RBD H結構,攜帶很多抗原信息的抗原決定簇結構zui近已獲得鑒定。

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