報(bào)告基因是一類使表達(dá)產(chǎn)物易于被檢測(cè)的基因,其作用原理是將報(bào)告基因的編碼序列及其表達(dá)調(diào)控序列與目的基因融合形成嵌合基因,在調(diào)控序列的作用下進(jìn)行表達(dá),通過對(duì)報(bào)告基因表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)來評(píng)價(jià)目的基因的表達(dá)狀況。常見的報(bào)告基因包括螢光素酶(Luciferase)、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)、β-半乳糖苷酶(β-gal)、分泌性人胎盤堿性磷酸酶(SEAP)和綠色熒光蛋白(GFP)等。

螢光素酶（Luciferase）是一類在生物體內(nèi)能夠催化熒光素或脂肪醛氧化發(fā)光的酶,從自然界能夠發(fā)光的生物體內(nèi)分離獲得。由于特異性強(qiáng)、靈敏度高、內(nèi)源性低、檢測(cè)不受細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì)的影響等優(yōu)點(diǎn),螢光素酶被作為報(bào)告基因（標(biāo)記蛋白）而被廣泛應(yīng)用。

雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)在單螢光素酶報(bào)告基因的基礎(chǔ)上引入了“內(nèi)參對(duì)照”報(bào)告基因，這樣可以在大程度上減小細(xì)胞數(shù)目、細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和轉(zhuǎn)染效率等外在因素對(duì)于實(shí)驗(yàn)的影響，使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為可信。

本期小愛給大伙帶來一款愛必信爆款雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒：雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（abs60341）。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

產(chǎn)品介紹：

本試劑盒先以螢光素（Luciferin）為底物來檢測(cè)螢火蟲螢光素酶的活性，然后加入抑制螢火蟲螢光素酶催化的物質(zhì)，同時(shí)加入腔腸素（Coelenterazine）檢測(cè)海腎螢光素酶的活性，實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)。適用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)、需要共報(bào)告基因建立內(nèi)參或?qū)崿F(xiàn)多重信號(hào)、需要報(bào)告基因減弱的情況如研究負(fù)調(diào)控對(duì)刺激產(chǎn)生的細(xì)胞反應(yīng)、實(shí)現(xiàn)較高檢測(cè)精度等情況。

圖1 雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)流程

應(yīng)用：

雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒是一款應(yīng)用廣泛的科研工具，現(xiàn)舉例跟大家詳細(xì)介紹下常見的螢光素酶報(bào)告基因的應(yīng)用。

應(yīng)用1：順式作用原件研究

**表示差異極顯著（P<0.01），* 表示差異顯著（P<0.05）

圖2 雞骨形態(tài)生成蛋白15（bone morphogenetic protein 15, BMP15）基因不同啟動(dòng)子截短體報(bào)告載體的雙螢光報(bào)告結(jié)果

雞骨形態(tài)生成蛋白15（bone morphogenetic protein 15, BMP15）基因不同啟動(dòng)子截短體報(bào)告載體的雙螢光報(bào)告結(jié)果顯示，BMP15 基因啟動(dòng)子-153-1 bp 為核心區(qū)域。

應(yīng)用2：細(xì)胞信號(hào)通路研究

圖3檢測(cè)不同濃度的HLY78系列衍生物對(duì)Wnt信號(hào)通路報(bào)告基因TOPflash的螢光素酶活性影響

通過檢測(cè)不同濃度的HLY78系列衍生物對(duì)Wnt信號(hào)通路報(bào)告基因TOPflash的螢光素酶活性影響，篩選出HLY78和HLY119對(duì)Wnt信號(hào)通路有抑制作用。

應(yīng)用3：反式作用因子研究

圖4 在-562- -200位點(diǎn)是Runx1 發(fā)揮對(duì)Mrgprd 基因的轉(zhuǎn)錄激活的關(guān)鍵位點(diǎn)

圖5 Runx1 通過+70 ～ +143 位點(diǎn)序列促進(jìn)Mrgprd 基因轉(zhuǎn)錄

Runx1（轉(zhuǎn)錄因子）對(duì)Mrgprd 基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制可能有多種，并非只是通過結(jié)合在Mrgprd 基因上游的結(jié)合位點(diǎn)來直接調(diào)控其轉(zhuǎn)錄。

應(yīng)用4：miRNA靶點(diǎn)研究

圖6 miRNA靶點(diǎn)研究案例

miR-1269b過表達(dá)可明顯降低293T細(xì)胞中METTL3-WT的螢光素酶活性，但對(duì)METTL3-MUT的活性沒有顯著影響，表明miR-1269b可靶向METTL3 3’UTR，負(fù)調(diào)控GC細(xì)胞中METTL3的表達(dá)。

注：應(yīng)用數(shù)據(jù)均來自文獻(xiàn)

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：

圖7 Abisn雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒與市面上同類產(chǎn)品對(duì)比結(jié)果

使用愛必信雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（abs60341）與市面上的同類產(chǎn)品進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)螢火蟲螢光素酶與海腎螢光素酶比值與國外名品牌同類產(chǎn)品最為接近。

最后，跟大家透漏個(gè)好消息：雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（abs60341）本月優(yōu)惠！

本期搭檔產(chǎn)品推薦：

參考文獻(xiàn)：

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【3】高廣亮, 李輝, 王啟貴. 雞肝臟基礎(chǔ)型脂肪酸結(jié)合蛋白基因啟動(dòng)子活性分析[C]// 中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家禽學(xué)分會(huì)代表會(huì)議暨全國家禽學(xué)術(shù)討論會(huì). 2013.

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