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如何清潔或再生色譜柱?

來源:廣州綠百草科學儀器有限公司   2023年04月27日 14:11  

背壓增加、保留時間變化和柱性能損失都是色譜柱入口篩板、色譜柱或固定相表面沉積物的常見癥狀。大多數情況下,這些問題可以通過使用正確的洗滌程序來克服。  越早使用色譜柱再生程序,您就越有可能恢復色譜柱的原始性能。  


在色譜柱的溶劑入口端收集強吸附物質,在許多情況下,洗滌過程中使用反向流動是有益的。與人們普遍認為的相反,逆流永遠不會損害填料良好的色譜柱。提到的流動方向通常是色譜柱最初填充的方向。請注意,不規則/無定形原始二氧化硅在逆流時可能會出現問題,因為可能會重新構造填充床。 當在這些不規則二氧化硅上反轉流動時,應始終格外小心。


請檢查我們針對不同固定相( 建議的再生程序,RP、NP、離子交換等 ) 并在這些程序后執行 CoA 色譜柱測試,如果原始壓力恢復,以評估色譜柱性能/峰對稱性。  


清洗和再生程序

如果足夠小心,就可以在很長一段時間內保持柱效和可靠性。本節旨在提供有關有助于延長 HPLC 色譜柱壽命的不同程序的信息。  


清潔與再生的區別

我們通常假設,分離后,柱或筒中*初存在的所有物質都已洗脫。運行后,在開始新的分離之前,用2-3柱體積的初始溶劑混合物清洗色譜柱。但是,如果流動相成分的強度不足以在常規運行期間將其洗脫,則一些強烈保留在色譜柱上的雜質將在進樣口處積聚。 發生這種情況時可能會出現一些不可忽視的問題:性能損失、背壓增加、峰拖尾、保留時間偏移或基線漂移。 為避免這種情況,強烈建議在出現任何這些癥狀之前定期清潔色譜柱。這個過程很簡單,不需要修改通常的色譜設置。 當清潔不充分時,可能需要進行更徹·底的處理,即再生,以避免丟棄色譜柱。  


建議的清潔和再生程序

使用的清潔程序越多,所需的條件就越不嚴格。 應在色譜柱儲存之前或色譜柱似乎堵塞時執行再生程序。 流速通常設置為低于分離期間的流速( 通常為 20% 至 50% )。  


色譜柱體積( 包括填料體積 ),單位為 mL = π x [色譜柱半徑,單位為厘米] 2 x [色譜柱長度,單位為厘米]  


柱子  建議的清潔程序  建議的再生程序  
Silia Chrom 高效液相色譜柱  - 設置流量( 通常的 20% 到 50% )   - 用 2-3 倍柱體積的以下每種溶劑沖洗  - 反吹色譜柱   - 設置流量( 通常的 20% 到 50% )   - 用 10 倍柱體積的以下每種溶劑沖洗  
反相柱  ( C18、C8、C4、C1、胺、氰基、苯基、PFP等 )  - 水/乙腈 (95/5) 以去除緩沖液   - 水/乙腈 (5/95)   - 分離過程中使用的流動相  - 水/乙腈 (95/5)   - 四氫呋喃   - 水/乙腈 (5/95)   - 分離過程中使用的流動相  
正相柱  ( 胺、氰基、二醇等 )  注意:切勿用水。  - MeOH/CHCl 3 (50/50)   - 乙酸乙酯   - 分離過程中使用的流動相  - MeOH/CHCl 3 (50/50)   - 異丙醇和乙酸乙酯   - 分離過程中使用的流動相  
非鍵合硅膠柱  ( 二氧化硅 )  - 己烷、異丙醇和二氯甲烷   - 分離過程中使用的流動相  - 己烷、異丙醇和二氯甲烷   - 分離過程中使用的流動相  
離子交換柱  ( SCX、SAX 等 )  - 5 mM 磷酸鹽緩沖液 pH 7.00   - 醋酸/水 (10/90)   - 水、甲醇和水  - 5 mM 磷酸鹽緩沖液 pH 7.00   - 醋酸/水 (10/90)   - 水、甲醇和水  



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