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細胞鉀離子(potassium ion)濃度熒光定量檢測試劑盒產品說明書(中文版)

來源:上海銘博生物科技有限公司   2023年04月25日 11:14  

細胞鉀離子(potassium ion)濃度熒光定量檢測試劑盒產品說明書(中文版)

 

主要用途

 

  細胞鉀離子(potassium ion)濃度熒光定量檢測試劑盒是一種旨在通過離子敏感性熒光探針PBFI離子結合后,其熒光強度顯著增強,在熒光分光光度儀下觀察相對熒光峰值的變化來測定樣品離子濃度*而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的其適用于各種動物和人體細胞裂解懸液樣品中總離子的濃度檢測。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩定,檢測敏感。

 

技術背景

 

鉀離子(potassium ionK是人體中的一種重要電介質和礦物質,尤其是細胞內和細胞外基質中的重要陽離子。其功能在于維持細胞內外的酸堿平衡、滲透壓、膜電位、神經肌肉功能等。血鉀增高,即高血鉀癥(hyperkalemia)與腎衰、脫水性休克、腎上腺皮質功能不全有關;而血鉀降低,即低鉀血癥(hypokalemia)與營養不良、負氮平衡、胃腸道液體流失等有關。正常人體的血鉀濃度范圍狹窄,在36毫摩爾。鉀的檢測包括化學沉淀法、離子選擇性電位分析法(ion selective potentiometryISP、火焰光度法(flame photometry)、原子吸收分光光度法等技術,但容易受到其它金屬元素的干擾,或者受限于儀器的特殊的要求。鉀結合性苯并呋喃間苯二甲酸potassium binding benzofuran isophthalatePBFI),是苯并呋喃間苯二甲酸衍生物,其熒光基團與重氮冠醚(diazocrown ether)的氮分子鏈接,產生相應配體的選擇性,一旦離子結合,其熒光強度迅速增強,可以敏感測定游離離子水平。在熒光分光光度儀下,激發波長340380nm,散發波長450550nm來定量測定鉀離子濃度。

 

產品內容

 

  清理液(Reagent A            毫升

  裂解液(Reagent B            毫升

  反應液(Reagent C            毫升

  飽和液(Reagent D            毫升

  陰性液(Reagent E            毫升

產品說明書               1

 

保存方式

 

保存  清理液(Reagent A4冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里;  反應液(Reagent C)避免光照;有效保證6

 

用戶自備

 

15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管:用于樣品操作的容器

細胞刮脫棒:用于貼壁細胞脫離

微型臺式離心機:用于樣品制備

黑色96孔板:用于樣品熒光測定的容器

熒光酶標儀:用于樣品熒光分析

 

實驗步驟

 

一、 樣品準備

 

1. 準備好25cm2細胞培養瓶或60mm細胞培養皿的待測培養細胞(1 X 106細胞)

2. 小心加入xx  清理液(Reagent A,覆蓋生長表面

3. 小心抽去清理液

4. 使用細胞刮脫棒輕柔刮脫細胞(注意:可以使用胰酶消化

5. 加入xx  清理液(Reagent A,混勻細胞

6. 移入到預冷的15毫升錐形離心管(注意:懸浮細胞從這一步驟開始

7. 放進4℃臺式離心機離心5分鐘,速度為300g

8. 小心抽去上清液

9. 加入xx  裂解液(Reagent B,充分混勻

10. 轉移到預冷的1.5毫升離心管

11. 強力渦旋震蕩15

12. 置于冰槽里孵育30分鐘

13. 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415

14. 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管

15. 移取10微升進行蛋白定量檢測(注意:建議使用   Bradford蛋白質濃度定量試劑盒-GMS30030.1

16. 即刻放進-70℃保存或置于冰槽里繼續后續操作

 

二、測定準備

 

1. 準備好待測樣品,例如細胞裂解懸液等,置于冰槽里備用

2. 設定好熒光酶標儀(25):激發波長345nm,散發波長510nm

 

三、熒光測定

 

1. 準備1黑色96孔板,標記為:樣品孔、空白對照孔、最大對照空

2. 移取100微升(20微克蛋白)樣品到樣品孔里

3. 移取xx  飽和液(Reagent D到最大對照空里

4. 移取xx  陰性液(Reagent E到空白對照空

5. 分別加入xx  反應液(Reagent C到所有孔里

6. 輕輕搖動黑色96板,混勻

7. 室溫下(25,孵育30分鐘,避免光照

8. 即刻放進熒光酶標儀測讀:獲得相對熒光單位(relative fluorescence unitRFU 

9. 計算樣品離子濃度(注意:不要遺忘乘上稀釋倍數

 

注意事項

 

1. 本產品為20次操作

2. 操作時,須戴手套

3. 孵育反應完成后即刻進行熒光測定

4. 用戶可以選擇激發波長340380nm,散發波長450550nm的任一波長進行檢測

5. 如果待測樣品濃度過高或過低,可以調整樣品濃度

6. 樣品濃度可以按照細胞數或蛋白量定義

7. 本公司提供系列生化檢測試劑產品

 

質量標準

 

1. 本產品經鑒定性能穩定

2. 本產品經鑒定檢測敏感

 

 


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