細(xì)胞鉀離子(potassium ion)濃度熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
細(xì)胞鉀離子(potassium ion)濃度熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
主要用途
細(xì)胞鉀離子(potassium ion)濃度熒光定量檢測試劑盒是一種旨在通過鉀離子敏感性熒光探針PBFI,與鉀離子結(jié)合后,其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng),在熒光分光光度儀下觀察相對(duì)熒光峰值的變化,來測定樣品中總鉀離子濃度的*而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種動(dòng)物和人體細(xì)胞裂解懸液樣品中總鉀離子的濃度檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,檢測敏感。
技術(shù)背景
鉀離子(potassium ion;K)是人體中的一種重要電介質(zhì)和礦物質(zhì),尤其是細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外基質(zhì)中的重要陽離子。其功能在于維持細(xì)胞內(nèi)外的酸堿平衡、滲透壓、膜電位、神經(jīng)肌肉功能等。血鉀增高,即高血鉀癥(hyperkalemia)與腎衰、脫水性休克、腎上腺皮質(zhì)功能不全有關(guān);而血鉀降低,即低鉀血癥(hypokalemia)與營養(yǎng)不良、負(fù)氮平衡、胃腸道液體流失等有關(guān)。正常人體的血鉀濃度范圍狹窄,在3至6毫摩爾。鉀的檢測包括化學(xué)沉淀法、離子選擇性電位分析法(ion selective potentiometry;ISP)、火焰光度法(flame photometry)、原子吸收分光光度法等技術(shù),但容易受到其它金屬元素的干擾,或者受限于儀器的特殊的要求。鉀結(jié)合性苯并呋喃間苯二甲酸(potassium binding benzofuran isophthalate;PBFI),是苯并呋喃間苯二甲酸衍生物,其熒光基團(tuán)與重氮冠醚(diazocrown ether)的氮分子鏈接,產(chǎn)生相應(yīng)配體的選擇性,一旦與鉀離子結(jié)合,其熒光強(qiáng)度迅速增強(qiáng),可以敏感測定游離鉀離子水平。在熒光分光光度儀下,激發(fā)波長340至380nm,散發(fā)波長450至550nm,來定量測定的鉀離子濃度。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液(Reagent A) 毫升
裂解液(Reagent B) 毫升
反應(yīng)液(Reagent C) 毫升
飽和液(Reagent D) 毫升
陰性液(Reagent E) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存 清理液(Reagent A)在4℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里; 反應(yīng)液(Reagent C)避免光照;有效保證6月
用戶自備
15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管:用于樣品操作的容器
細(xì)胞刮脫棒:用于貼壁細(xì)胞脫離
微型臺(tái)式離心機(jī):用于樣品制備
黑色96孔板:用于樣品熒光測定的容器
熒光酶標(biāo)儀:用于樣品熒光分析
實(shí)驗(yàn)步驟
一、 樣品準(zhǔn)備
1. 準(zhǔn)備好25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶或60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿的待測培養(yǎng)細(xì)胞(1 X 106細(xì)胞)
2. 小心加入xx 清理液(Reagent A),覆蓋生長表面
3. 小心抽去清理液
4. 使用細(xì)胞刮脫棒輕柔刮脫細(xì)胞(注意:可以使用胰酶消化)
5. 加入xx 清理液(Reagent A),混勻細(xì)胞
6. 移入到預(yù)冷的15毫升錐形離心管(注意:懸浮細(xì)胞從這一步驟開始)
7. 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g
8. 小心抽去上清液
9. 加入xx 裂解液(Reagent B),充分混勻
10. 轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管
11. 強(qiáng)力渦旋震蕩15秒
12. 置于冰槽里孵育30分鐘
13. 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
14. 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管
15. 移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(注意:建議使用 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-GMS30030.1)
16. 即刻放進(jìn)-70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
二、測定準(zhǔn)備
1. 準(zhǔn)備好待測樣品,例如細(xì)胞裂解懸液等,置于冰槽里備用
2. 設(shè)定好熒光酶標(biāo)儀(25℃):激發(fā)波長345nm,散發(fā)波長510nm
三、熒光測定
1. 準(zhǔn)備1個(gè)黑色96孔板,標(biāo)記為:樣品孔、空白對(duì)照孔、最大對(duì)照空
2. 移取100微升(20微克蛋白)樣品到樣品孔里
3. 移取xx 飽和液(Reagent D)到最大對(duì)照空里
4. 移取xx 陰性液(Reagent E)到空白對(duì)照空
5. 分別加入xx 反應(yīng)液(Reagent C)到所有孔里
6. 輕輕搖動(dòng)黑色96孔板,混勻
7. 室溫下(25℃),孵育30分鐘,避免光照
8. 即刻放進(jìn)熒光酶標(biāo)儀測讀:獲得相對(duì)熒光單位(relative fluorescence unit;RFU)
9. 計(jì)算樣品鉀離子濃度(注意:不要遺忘乘上稀釋倍數(shù))
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品為20次操作
2. 操作時(shí),須戴手套
3. 孵育反應(yīng)完成后即刻進(jìn)行熒光測定
4. 用戶可以選擇激發(fā)波長340至380nm,散發(fā)波長450至550nm的任一波長進(jìn)行檢測
5. 如果待測樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度
6. 樣品濃度可以按照細(xì)胞數(shù)或蛋白量定義
7. 本公司提供系列鉀生化檢測試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。