細胞鉀離子(potassium ion)濃度熒光定量檢測試劑盒產品說明書(中文版)
細胞鉀離子(potassium ion)濃度熒光定量檢測試劑盒產品說明書(中文版)
主要用途
細胞鉀離子(potassium ion)濃度熒光定量檢測試劑盒是一種旨在通過鉀離子敏感性熒光探針PBFI,與鉀離子結合后,其熒光強度顯著增強,在熒光分光光度儀下觀察相對熒光峰值的變化,來測定樣品中總鉀離子濃度的*而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物和人體細胞裂解懸液樣品中總鉀離子的濃度檢測。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩定,檢測敏感。
技術背景
鉀離子(potassium ion;K)是人體中的一種重要電介質和礦物質,尤其是細胞內和細胞外基質中的重要陽離子。其功能在于維持細胞內外的酸堿平衡、滲透壓、膜電位、神經肌肉功能等。血鉀增高,即高血鉀癥(hyperkalemia)與腎衰、脫水性休克、腎上腺皮質功能不全有關;而血鉀降低,即低鉀血癥(hypokalemia)與營養不良、負氮平衡、胃腸道液體流失等有關。正常人體的血鉀濃度范圍狹窄,在3至6毫摩爾。鉀的檢測包括化學沉淀法、離子選擇性電位分析法(ion selective potentiometry;ISP)、火焰光度法(flame photometry)、原子吸收分光光度法等技術,但容易受到其它金屬元素的干擾,或者受限于儀器的特殊的要求。鉀結合性苯并呋喃間苯二甲酸(potassium binding benzofuran isophthalate;PBFI),是苯并呋喃間苯二甲酸衍生物,其熒光基團與重氮冠醚(diazocrown ether)的氮分子鏈接,產生相應配體的選擇性,一旦與鉀離子結合,其熒光強度迅速增強,可以敏感測定游離鉀離子水平。在熒光分光光度儀下,激發波長340至380nm,散發波長450至550nm,來定量測定的鉀離子濃度。
產品內容
清理液(Reagent A) 毫升
裂解液(Reagent B) 毫升
反應液(Reagent C) 毫升
飽和液(Reagent D) 毫升
陰性液(Reagent E) 毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存 清理液(Reagent A)在4℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里; 反應液(Reagent C)避免光照;有效保證6月
用戶自備
15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管:用于樣品操作的容器
細胞刮脫棒:用于貼壁細胞脫離
微型臺式離心機:用于樣品制備
黑色96孔板:用于樣品熒光測定的容器
熒光酶標儀:用于樣品熒光分析
實驗步驟
一、 樣品準備
1. 準備好25cm2細胞培養瓶或60mm細胞培養皿的待測培養細胞(1 X 106細胞)
2. 小心加入xx 清理液(Reagent A),覆蓋生長表面
3. 小心抽去清理液
4. 使用細胞刮脫棒輕柔刮脫細胞(注意:可以使用胰酶消化)
5. 加入xx 清理液(Reagent A),混勻細胞
6. 移入到預冷的15毫升錐形離心管(注意:懸浮細胞從這一步驟開始)
7. 放進4℃臺式離心機離心5分鐘,速度為300g
8. 小心抽去上清液
9. 加入xx 裂解液(Reagent B),充分混勻
10. 轉移到預冷的1.5毫升離心管
11. 強力渦旋震蕩15秒
12. 置于冰槽里孵育30分鐘
13. 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
14. 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管
15. 移取10微升進行蛋白定量檢測(注意:建議使用 Bradford蛋白質濃度定量試劑盒-GMS30030.1)
16. 即刻放進-70℃保存或置于冰槽里繼續后續操作
二、測定準備
1. 準備好待測樣品,例如細胞裂解懸液等,置于冰槽里備用
2. 設定好熒光酶標儀(25℃):激發波長345nm,散發波長510nm
三、熒光測定
1. 準備1個黑色96孔板,標記為:樣品孔、空白對照孔、最大對照空
2. 移取100微升(20微克蛋白)樣品到樣品孔里
3. 移取xx 飽和液(Reagent D)到最大對照空里
4. 移取xx 陰性液(Reagent E)到空白對照空
5. 分別加入xx 反應液(Reagent C)到所有孔里
6. 輕輕搖動黑色96孔板,混勻
7. 室溫下(25℃),孵育30分鐘,避免光照
8. 即刻放進熒光酶標儀測讀:獲得相對熒光單位(relative fluorescence unit;RFU)
9. 計算樣品鉀離子濃度(注意:不要遺忘乘上稀釋倍數)
注意事項
1. 本產品為20次操作
2. 操作時,須戴手套
3. 孵育反應完成后即刻進行熒光測定
4. 用戶可以選擇激發波長340至380nm,散發波長450至550nm的任一波長進行檢測
5. 如果待測樣品濃度過高或過低,可以調整樣品濃度
6. 樣品濃度可以按照細胞數或蛋白量定義
7. 本公司提供系列鉀生化檢測試劑產品
質量標準
1. 本產品經鑒定性能穩定
2. 本產品經鑒定檢測敏感
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