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凝膠凈化一般的操作步驟及其應用途徑

來源:北京萊伯泰科儀器股份有限公司   2023年04月12日 14:36  
  凝膠凈化是一種常見的生物分離技術,其使用凝膠作為分離介質,將混合物中的生物大分子分離出來。可以用于分離DNA、RNA、蛋白質等生物大分子。工作原理是將混合物在凝膠上進行分離,凝膠中的孔隙可以與分子大小相適應,從而達到分離的目的。根據分離物的種類和性質不同,可以選擇不同種類的凝膠,例如瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、瓊脂凝膠等。其中,瓊脂糖凝膠適用于DNA和RNA的分離,聚丙烯酰胺凝膠適用于蛋白質的分離。
  
  凝膠凈化的步驟一般包括樣品的制備、凝膠制備、樣品加載、電泳、染色和可視化等。首先,需要將樣品進行制備,例如將DNA純化、蛋白質裂解及去除雜質等。然后,制備凝膠,一般是將所選凝膠加熱至液態狀態后,加入適當的縮合劑并澆鑄在凝膠板上。接下來,需要將樣品加載到凝膠中,一般通過電泳將樣品移動到凝膠內。電泳完成后,需要對凝膠進行染色和可視化,例如乙酰胺染色、銀染色或熒光染色等。最終,對可視化的結果進行分析得出分離物的信息。
  
  凝膠凈化的幾種應用途徑。
  
  1.蛋白質純化
  
  用于從復雜的混合物中純化目標蛋白質。例如,在細胞裂解液中尋找特定蛋白質或蛋白質群體時,可以將細胞裂解液經過離心、過濾等預處理后,添加適當的凝膠進行分離,再經過不同類型的凝膠層析步驟,可以實現針對目標蛋白的高效純化。
  
  2.DNA片段分離
  
  用于從DNA混合物中分離特定大小的DNA片段。例如,在PCR反應中需要純化目標DNA片段時,可以使用瓊脂糖凝膠進行電泳,根據DNA片段大小差異將目標DNA片段從其他DNA片段中分離出來,然后使用凝膠切割和提取等技術進行純化。
  
  3.藥物篩選
  
  用于藥物篩選。例如,在藥物篩選中需要分離和鑒定小分子與特定蛋白之間的相互作用時,可以將蛋白質與小分子混合后通過凝膠層析分離,然后再使用質譜等技術進行鑒定。
  
  4.細胞分離
  
  用于細胞分離。例如,在免疫篩選中需要分離特定細胞亞群時,可以使用凝膠轉移技術,將免疫分子固定在凝膠上,然后將細胞混懸液加入,特定細胞亞群會在凝膠中沉積,從而實現細胞分離和純化。

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