TNF-α ELISA試劑盒將用于檢測和量化內源性TNF-α的蛋白質水平。該測定可識別小鼠TNF-α。TNF-α特異性抗體已預先包被到微孔上。樣品中的TNF-α蛋白在孵育后被包被的抗體捕獲。經過大量洗滌后，加入另一種針對TNF-α的生物素化特異性抗體以檢測捕獲的TNF-α蛋白。對于信號開發，加入鏈霉親和素-HRP，然后加入四甲基聯苯胺（TMB）試劑。含有硫酸的溶液用于停止顯色，并且在450nm處可測量與結合蛋白量成比例的顏色強度，校正波長設置為630nm。

艾美捷小鼠TNF-α ELISA試劑盒#NDC-KSP-ZWL3G1-96基本參數：

應用 酶聯免疫吸附法

描述 小鼠 TNF-α 酶聯免疫酶抑制劑試劑盒

類型 檢測與檢測

范圍 7.8-500 皮克/毫升

研究領域 細胞信號傳導

樣品類型 血清，血漿

敏感性 1.0 皮克/毫升

規格 96t

物種反應性 鼠

材料/試劑：

包衣抗體（包衣緩沖液中1-10μg/ml）

樣品、標準品和對照品

初級抗體（未標記或生物素化）

酶標記的第二抗體

基底

涂層緩沖液：0.15M碳酸鈉，0.35M碳酸氫鈉，pH 9.6

（碳酸鹽涂層緩沖液）

磷酸鹽緩沖鹽水（PBS），pH7.4

封閉緩沖液：PBS，1%BSA

洗滌溶液：PBS，0.05%Tween--20

稀釋緩沖液：PBS，0.05%Tween--20，0.1%牛血清白蛋白；PBS，0.1%牛血清白蛋白

停止解決方案；2%草酸

小鼠TNF-α ELISA試劑盒相關程序：

在測定之前，兩種抗體制劑都應純化且不含白蛋白。這個須標記檢測抗體。

1.捕獲抗體涂層

將約100μl的涂層抗體溶液加入到每個井。所使用的抗體的量將取決于個體測定，優化緩沖液和涂層濃度（1-10μg/孔）。抽吸涂層溶液。

2.閉塞

微量滴定板上蛋白質結合的剩余位點必須飽和通過與阻斷緩沖液孵育。用200μl封閉緩沖液填充孔。用粘性塑料覆蓋板，在室溫下孵育60-90分鐘溫度或在4°C下過夜。用洗滌液洗井四次。

3.樣品培養

將100μl稀釋后的樣品、標準品和對照品加入孔中。全部的稀釋應在稀釋緩沖液中進行。用粘性塑料覆蓋板，并在37°C下孵育60-90分鐘。用清洗液將盤子清洗四次。

4.與第一抗體孵育

添加100μl一級抗體。添加量可在中確定初步實驗。為了準確定量，第一抗體應該過量使用。所有稀釋均應在稀釋緩沖液中進行。

5.與第二抗體（或在生物素化的第一抗體）

添加100μl標記的第二抗體。要添加的數量可以是在初步實驗中確定。為了精確定量，標記

應過量使用第二抗體。所有稀釋均應在稀釋緩沖液。用粘性塑料覆蓋板，在室溫下孵育60-90分鐘溫度或-20°C。用洗滌液洗滌四次。

6.底物培養

按照制造商的指示添加基材。經過建議的培養時間后，將停止溶液添加到每個孔中。可以在ELISA讀取器上測量目標波長下的光密度在加入停止溶液后30分鐘內。

7.數據分析

計算每組重復標準品的平均吸光度值，樣品和對照。如果單個吸光度值與相應的吸光度值相差超過15%平均值，則認為結果可疑，應重新分析樣品。通過使用能夠從而產生良好的曲線擬合。如果樣品已被稀釋，則根據標準曲線確定的濃度必須乘以稀釋系數。