細胞培養泛指所有體外培養,其含義是指從動物活體體內取出組織,于模擬體內生理環境等特定的體內條件下,進行孵育培養,使之生存并生長。細胞培養工作現已廣泛應用于生物學、醫學、新藥研發等各個領域,成為最重要的基礎科學之一。
細胞培養常用培養基來維持細胞生長的所需營養,培養基一般分為固體培養基和液體培養基。液體培養基中加入一定的凝固劑(如瓊脂)或固體培養物(如麩皮、大米等)便成為固體培養基。固體培養基在營養通風的表面可培養單個菌落,在細胞的分離鑒定、技術等方面起到相當重要的作用。下面來簡單介紹下細胞培養的過程及注意事項。
細胞培養前期準備
1、培養基、血清、胰酶、PBS、培養瓶、滴管、離心管?;?
2、100ml玻璃瓶10個(用于分裝血清,配成10%培養液);25-50ml玻璃瓶2個(裝胰酶);500ml玻璃瓶2個(分裝PBS);?
3、所有玻璃器皿洗凈烘干泡酸再洗凈烘干消毒;塑料或橡膠塞則洗凈烘干蒸餾水煮30min 烘干消毒;
4、酒精燈、鑷子、剪刀、廣口玻璃瓶、消毒用酒精、棉球、吸耳球、酒精噴壺、橡膠手套
細胞培養基本技術
1、建立細胞凍存庫,細胞凍存庫應該分主細胞庫和工作細胞庫,當需要做實驗時從主細胞庫中復蘇細胞建立工作細胞庫。每一個凍存標本都應明確記錄細胞的性質、代數及有無污染。
2、進行詳細的實驗記錄,包括細胞系的種類及來源、有無污染、細胞代數和倍增時間、以及選擇性突變。經過連續傳代培養的細胞與它較早代數的凍存細胞相比,隨著培養時間的延長,細胞在適應環境的過程中,其生物特性已發生了改變。培養的細胞由若干生長速度及活力各異的亞群組成。隨著培養時間的延長生長速,度快及活力高的細胞亞群逐漸占優勢這種選擇性,趨勢會影響整個細胞群的生物特性。應用不同代數的細胞連續進行實驗則結果會發生偏差。建立細胞凍存庫就能避免這種影響通過復蘇相同代數的細胞,人們就能在較為均一的條件下重復實驗。
3、為了避免細胞被外界污染物污染以及操作過程中產生的飛沫限制在超凈工作臺中。超凈工作臺需要合理的布置和維護,工作臺內減少物品,使用時采用垂直氣流比水平氣流安全。
4、為了避免細胞發生污染,在同一個實驗室內培養不同的細胞系所使用的培養基應分開使用。
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