綠膿菌素測定培養基(PDP)的操作步驟與應用！

一、背景

綠膿菌素測定培養基(PDP)用于綠膿桿菌的綠膿菌素測定試驗。

1、檢驗原理：蛋白胨和甘油提供碳氮源；氯化鎂和硫酸鉀促進綠膿色素和熒光素的產生；瓊脂是培養基的凝固劑。

2、原理：銅綠假單胞菌能產生的綠膿菌素能被氯仿提取，且在水中溶解度比氯仿大，并且會發生可逆的氧化還原反應，氧化時堿性呈藍色，酸性呈紅色。所以加入鹽酸溶液并震搖后，綠膿菌素會由氯仿轉移至鹽酸溶液中，并在酸性環境中呈紅色。

3、用法：稱取本品49.4g,另稱取10g甘油,溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘,備用。

二、操作步驟

1、按國家標準、SN標準、FDA標準或其它方法制備樣品液

2、取樣品液1ml加入冷卻至45-50℃顯色培養基中混勻或涂布于平板上

3、36±1℃培養18～24h，選用有30～200個菌落的平板，計數平板上出現的典型大腸桿菌菌落。大腸桿菌典型菌落為藍綠色，其它細菌為無色或黃色菌落。總大腸桿菌=藍綠色菌落

4、對可疑大腸桿菌菌落可劃線接種到營養瓊脂平板上，36±1℃培養12-16小時，挑取單菌落做大腸桿菌全套生化試驗

綠膿桿菌，又稱銅綠假單胞菌（學名：Pseudomonasaeruginosa），1882年首先由Gersard從傷口膿液中分離到，是一種革蘭氏陰性菌、好氧、呈長棒形的細菌，只有單向的運動性。它是一種機會性感染細菌，且對植物亦是機會性感染的，感染后因膿汁和滲出液等病料呈綠色。綠膿桿菌，廣泛分布于自然界及正常人皮膚、腸道和呼吸道，是臨床上較常見的條件致病菌之一。

三、應用

用于紅樹林土壤VBNC細菌的分離及其銅綠假單胞菌群體感應抑制作用研究：

紅樹林作為一個微生物資源寶庫,咸淡水規律交替的特殊環境,強酸性、強還原性、高鹽量的特性使其有可能存在許多具有特殊功能的細菌,其中不乏活的不可培養（viablebutnon-culturable,VBNC）狀態菌。但是目前傳統方法只能分離到環境中不到總量的0.01%-10%微生物,限制了人們對紅樹林微生物資源的認識并影響了對其機能的正確把握。

利用藤黃微球菌產生的復蘇促進因子（resuscitation promoting factor,Rpf）和MPN（most probable number）培養體系相結合,分離紅樹林土壤中可復蘇培養的VBNC資源菌種,并篩選出對群體感應有抑制作用的菌株,嘗試探索微生物VBNC現象與群體感應之間的相關性。

本次實驗共分離純化菌株144株,其中VBNC狀態菌83株,分別屬于4個門Actinobacteria、Firmicutes、Proteobacteria和Bacteroidetes,6個綱,12個目,12個科和22個屬。基于利用已報道用于檢測群體感應（quorum sensing,QS）的菌株CV026（Chromobacterium violaceum ATCC 31532）和VIR07（Chromobacteri m violaceum ATCC 12472）,對分離獲得的51株菌株進行比對篩選,發現一株群體感應抑制效果的菌株LQC3M004（Lactobacillus brevis）。

研究發現,該菌株經過信號分子誘導后的裂解液能顯著降低銅綠假單胞菌綠膿菌素和生物膜產生量,當裂解液蛋白濃度為1mg/mL,2mg/mL時,對綠膿菌素產生的抑制率分別為25.16%,30.75%;當裂解液蛋白濃度為1 mg/mL時對生物膜的抑制率為16.93%,而裂解液蛋白濃度在2 mg/mL時其抑制率達到33.00%。

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