成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>工作原理>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

細胞β氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase)活性比色法

來源:上海銘博生物科技有限公司   2023年02月22日 13:23  

MB50271.1 v.A

 

    細胞β氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase)活性比色法定量檢測試劑盒

產(chǎn)品說明書(中文版)

 

主要用途

 

    細胞β氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase)活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過底物PNP-NAG受到β氨基己糖苷酶催化水解后,在堿性環(huán)境下,呈現(xiàn)黃色,即采用比色法來測定樣品中酶活性而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的其適用于各種動物和人體細胞裂解懸液樣品中β氨基己糖苷酶的活性檢測。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。

 

技術(shù)背景

 

β氨基己糖苷酶(β-hexosaminidaseEC3.2.1.52.又稱為N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl--β-D-GlucosaminidaseNAGase)屬于含有20個糖苷水解酶(glycoside hydrolase)家族,也是肽聚糖水解酶,為溶酶體細胞器中的酶之一。其功能在于水解N-乙酰-β-D-氨基己糖苷中的末端N-乙酰-β-D-氨基己糖殘基(N-acetyl-D-hexosamine   residues),參與細胞內(nèi)糖蛋白和糖脂的分解代謝,包括蛋白和中性糖脂中的寡糖、粘多糖等水解。具有宿主抗感染防御作用。β氨基己糖苷酶為同源二聚體結(jié)構(gòu),有αβ兩個亞體構(gòu)成:HEXAHEXB。人體缺乏HEXAHEXB,將導(dǎo)致神經(jīng)退行性相關(guān)的疾病,例如家族黑蒙性病(Tay-Sachs病)和神經(jīng)節(jié)苷脂貯積病  Sandhoff )。 基于底物4-硝基苯基 N-乙酰-β-D-葡萄糖胺(4-Nitrophenyl N-acetyl-β-D-glucosaminidePNP-NAG),在β氨基己糖苷酶的作用下,水解釋放出硝基苯酚(p-nitrophenol)和N-乙酰-β-D-葡萄糖胺(N-acetyl-β-D-glucosamineNAG,在堿性環(huán)境下,呈現(xiàn)出黃色,在分光光度儀下,產(chǎn)生吸光峰值變化405nm 波長),來定量分析β氨基己糖苷酶的活性。反應(yīng)系統(tǒng)為:

         

產(chǎn)品內(nèi)容

 

    緩沖液(Reagent A         毫升

    反應(yīng)液(Reagent B         毫升

    堿性液(Reagent C           毫升

    陰性液(Reagent D           微升

    清理液(Reagent E         毫升

    裂解液(Reagent F         毫升

產(chǎn)品說明書               1

 

保存方式

 

保存    反應(yīng)液(Reagent B在-20冰箱里,避免光照;其余的保存在4冰箱里,有效保證6

 

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管:用于樣品操作的容器

15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器

細胞刮脫棒:用于細胞脫離

(微型)臺式離心機:用于樣品操作

比色皿或96孔板:用于比色分析的容器

分光光度儀或酶標儀:用于比色分析

 

實驗步驟

 

一、 樣品準備

 

1. 準備好75cm2細胞培養(yǎng)瓶或100mm細胞培養(yǎng)皿的待測培養(yǎng)細胞(15 X 107細胞)

2. 小心加入xx毫升    清理液(Reagent E,覆蓋生長表面

3. 小心抽去清理液

4. 使用細胞刮脫棒輕柔刮脫細胞(注意:可以使用胰酶消化

5. 加入xx毫升    清理液(Reagent E,混勻細胞

6. 移入到預(yù)冷的15毫升錐形離心管(注意:懸浮細胞從這一步驟開始

7. 放進4℃臺式離心機離心5分鐘,速度為300g

8. 小心抽去上清液

9. 加入xx微升    裂解液(Reagent F,充分混勻

10. 轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管

11. 強力渦旋震蕩15

12. 置于冰槽里孵育30分鐘

13. 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415

14. 小心移取500微升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管

15. 移取10微升進行蛋白定量檢測(注意:建議使用     Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-GMS30030.1

16. 即刻放進-70保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作

二、 測定準備

 

1. 準備好待測樣品(例如細胞裂解萃取懸液樣品等),置于冰槽里

2. 設(shè)定好分光光度儀(溫度為37℃):波長405nm,并置零

3.     緩沖液(Reagent A室溫下均衡溫度

 

三、 背景對照測定

 

1. 移取xx微升    緩沖液(Reagent A到新的比色皿

2. 加入xx微升    反應(yīng)液(Reagent B

3. 加入xx微升    陰性液(Reagent D

4. 上下傾倒數(shù)次,混勻

5. 37℃溫度下孵育10分鐘

6. 加入xx微升    堿性液(Reagent C

7. 上下傾倒數(shù)次,混勻

8. 37℃溫度下孵育5分鐘

9. 即刻放進分光光度儀檢測,此為背景空對照

 

四、 樣品測定

 

1. 移取xx微升    緩沖液(Reagent A到新的比色皿

2. 加入xx微升    反應(yīng)液(Reagent B

3. 加入50微升待測樣品(50微克蛋白)(注意:樣品須清澈,且pH小于7.5

4. 上下傾倒數(shù)次,混勻

5. 37℃溫度下孵育10分鐘

6. 加入xx微升    堿性液(Reagent C

7. 上下傾倒數(shù)次,混勻

8. 37℃溫度下孵育5分鐘

9. 即刻放進分光光度儀檢測,此為樣品讀數(shù) 

 

四、計算樣品活性

 

五、 酶標儀測定

 

1. 96孔板上做好相應(yīng)標記:背景對照和樣品

2. 分別移取xx微升    緩沖液(Reagent A到相應(yīng)孔

3. 分別加入xx微升    反應(yīng)液(Reagent B

4. 分別加入xx微升    陰性液(Reagent D待測樣品(20微克蛋白)(注意:樣品須清澈,且pH小于7.5

5. 輕輕搖動96孔板

6. 37溫度下孵育10分鐘

7. 分別加入xx微升    堿性液(Reagent C

8. 輕輕搖動96孔板

9. 37溫度下孵育5分鐘

10. 即刻放進酶標儀檢測 

11. 活性計算

 

注意事項

 

1. 本產(chǎn)品為20次操作,包括背景對照

2. 操作時,須戴手套

3. 系統(tǒng)操作過程中,背景測定只需1

4. 樣品須澄清,至關(guān)重要

5. 建議使用比色皿測定

6. 加樣后3秒內(nèi)比色測定

7. 測定值由變化;測定可持續(xù)10分鐘

8. 比色測定后,比色皿須清洗

9. 樣本測定10分鐘讀數(shù)0分鐘讀數(shù)表明具有酶活性

10. 建議待測樣本蛋白濃度為50微克/50微升;如果樣本酶活性過低或過高,則可以增加或降低樣本量(本公司提供      Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒GMS30030.1

11. 如果待測樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度

12. β氨基己糖苷酶單位活性定義為:在37pH 4.25條件下,每分鐘內(nèi)能夠釋放1微摩爾硝基苯酚所需的酶量作為一個活性單位

13. 本公司提供系列細胞酶學檢測試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標準

 

1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感

 

 


免責聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權(quán)行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權(quán)等法律責任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
主站蜘蛛池模板: 久草免费福利资源站在线观看| 国产女同一区二区三区五区| 精品人妻无码日本一区二区三区| 欧美 亚洲 综合 在线| 欧美精品一区二区少妇免费A片| 性一交一乱一美A片裸体| 国产精品人妻一区夜夜爱| 日韩中文字幕亚洲欧美| 嫩草AV久久伊人妇女| 国精一区二区AV在线观看网站| 日韩精品一区二区三区乱码| 久久精品99国产精品亚洲| 国产资源视频在线观看91| 五月色丁香婷婷网蜜臀AV| 欧美精品在线一区| 日韩va欧美va久久| JAPAN白嫩丰满人妻VIDEOSHD| 蜜臀AV99无码精品国产专区| 亚洲欧美日韩在线另类| 日韩五码 中文字幕| 无码AV爱搞搞AV| 中文无码喷潮在线播放| 国产麻豆一精品AV一免费软件| 国产欧美日韩一级二级三级| 澳门在线高清一级毛片| 日韩精品无码视频一区二区蜜桃| 日本韩国国产欧美在线观看| 日韩精品一区二区精品| 国产精品看久久久无码| 国产免费又色又爽又黄的小说| 色综合久久五月| 欧美成人三级网站在线观看| 国产欧美日韩在线视频观看| 欧美日韩成人精品一区二区| AV无码A片高潮AV| 免看黄大片AA| 日韩欧美国产精品综合嫩v| FREE HD XXXX VIDEO TUBE8| 美女扒开腿让男人桶爽APP免费看| 韩国A片三級三級三級| 欧美日韩国产成人一区二区|